| 摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 縮略词表 | 第11-12页 |
| 第一部分 | 第12-29页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-29页 |
| 一、蛋白质组学研究进展 | 第12-16页 |
| 1 蛋白质组学的概念与意义 | 第12页 |
| 2 蛋白质组学研究的关键技术 | 第12-14页 |
| 2.1 双向凝胶电泳技术 | 第12-13页 |
| 2.2 质谱技术 | 第13-14页 |
| 2.3 生物信息学技术 | 第14页 |
| 3 向电泳技术在植物抗性研究中的应用 | 第14-16页 |
| 3.1 在抗病胁迫研究中的应用 | 第14-15页 |
| 3.2 在盐胁迫研究中的应用 | 第15页 |
| 3.3 在干旱胁迫研究中的应用 | 第15页 |
| 3.4 在低温胁迫研究中的应用 | 第15-16页 |
| 二、植物抗病性研究概况 | 第16-25页 |
| 1 植物抗病的分子机制 | 第16-18页 |
| 1.1 R基因介导的抗病反应 | 第16-17页 |
| 1.2 RNA沉默 | 第17-18页 |
| 1.3 RNA沉默和R基因信号转导的相互作用 | 第18页 |
| 2 抗病基因的克隆 | 第18-22页 |
| 2.1 经克隆得到的R基因及分类 | 第18页 |
| 2.2 植物抗病基因的克隆方法 | 第18-19页 |
| 2.3 植物抗病毒基因工程策略 | 第19-22页 |
| 3 抗大豆花叶病基因研究进展 | 第22-25页 |
| 3.1 大豆花叶病毒研究进展 | 第22-25页 |
| 三、植物类甜味蛋白Thaumatin-like proteins(TLP)研究进展 | 第25-28页 |
| 1 类甜味蛋白的定义和性质 | 第25页 |
| 2 类甜蛋白的结构特征 | 第25-26页 |
| 3 类甜蛋白的生物学功能 | 第26-28页 |
| 3.1 类甜蛋白的抗真菌功能 | 第26页 |
| 3.2 类甜蛋白的其它功能 | 第26-28页 |
| 本研究的目的与意义 | 第28-29页 |
| 第二部分 研究报告 | 第29-72页 |
| 第二章 大豆花叶病毒诱导下的大豆叶片差异蛋白组分析 | 第30-42页 |
| 1 材料和方法 | 第30-34页 |
| 1.1 试验材料 | 第30页 |
| 1.2 主要试剂 | 第30页 |
| 1.3 主要仪器 | 第30-31页 |
| 1.4 试验方法 | 第31-34页 |
| 1.4.1 大豆叶片可溶性蛋白的提取 | 第31页 |
| 1.4.2 蛋白质浓度测定 | 第31页 |
| 1.4.3 大豆叶片双向电泳(2-DE) | 第31-33页 |
| 1.4.4 染色 | 第33页 |
| 1.4.5 荧光定量PCR分析 | 第33-34页 |
| 2 结果和分析 | 第34-40页 |
| 2.1 接种不同时间段的双向电泳差异蛋白点分析 | 第34页 |
| 2.2 大豆叶片接种大豆花叶病毒4h后差异蛋白点的确定 | 第34-39页 |
| 2.3 差异蛋白点的质谱结果 | 第39页 |
| 2.4 GmTLP基因对大豆接种SMV后在转录水平上不同时间段的响应 | 第39-40页 |
| 3 讨论 | 第40-42页 |
| 第三章 大豆病程相关基因GmTLP的克隆与序列分析 | 第42-58页 |
| 1 材料与方法 | 第42-46页 |
| 1.1 材料 | 第42页 |
| 1.2 大豆叶片DNA的提取 | 第42页 |
| 1.3 大豆总RNA的提取及纯化 | 第42-43页 |
| 1.3.1 大豆总RNA的提取 | 第42-43页 |
| 1.3.2 RNA的纯化 | 第43页 |
| 1.4 cDNA第一链的合成 | 第43页 |
| 1.5 序列搜索与引物设计 | 第43-44页 |
| 1.6 GmTLP的生物信息学分析 | 第44-45页 |
| 1.6.1 GmTLP1蛋白的疏水性分析 | 第44页 |
| 1.6.2 GmTLP1蛋白的跨膜区分析 | 第44页 |
| 1.6.3 GmTLP1蛋白的信号肽预测 | 第44-45页 |
| 1.6.4 GmTLP1蛋白的二级结构分析 | 第45页 |
| 1.6.5 GmTLP1蛋白的三级结构分析 | 第45页 |
| 1.6.6 GmTLP基因及其同源基因的进化树分析 | 第45页 |
| 1.7 细胞定位 | 第45-46页 |
| 1.8 半定量RT-PCR分析 | 第46页 |
| 2 结果与分析 | 第46-56页 |
| 2.1 从cDNA和DNA中扩增GmTLP的两个拷贝 | 第46-51页 |
| 2.2 GmTLP的生物信息学分析 | 第51-54页 |
| 2.2.1 GmTLP1蛋白的疏水性分析 | 第51页 |
| 2.2.2 GmTLP1蛋白的跨膜区分析 | 第51-52页 |
| 2.2.3 GmTLP1蛋白的信号肽预测 | 第52页 |
| 2.2.4 GmTLP1的二级结构预测 | 第52-53页 |
| 2.2.5 GmTLP1的三级结构预测 | 第53-54页 |
| 2.2.6 GmTLP基因及其同源基因的进化树分析 | 第54页 |
| 2.3 细胞定位 | 第54-55页 |
| 2.4 半定量RT-PCR分析 | 第55-56页 |
| 3 讨论 | 第56-58页 |
| 3.1 GmTLP基因在不同材料中存在序列差异 | 第56页 |
| 3.2 GmTLP的生物信息学分析及亚细胞定位结果 | 第56-58页 |
| 第四章 GmTLP1基因转化烟草及功能分析 | 第58-72页 |
| 1 材料与方法 | 第58-62页 |
| 1.1 材料 | 第58页 |
| 1.2 表达载体的构建 | 第58-59页 |
| 1.3 农杆菌叶盘浸染法转化烟草 | 第59-62页 |
| 1.3.1 受体材料准备 | 第59页 |
| 1.3.2 农杆菌的培养 | 第59页 |
| 1.3.3 农杆菌浸染叶盘 | 第59页 |
| 1.3.4 选择培养 | 第59页 |
| 1.3.5 继代选择培养 | 第59-60页 |
| 1.3.6 生根培养 | 第60页 |
| 1.3.7 转基因烟草阳性植株的鉴定 | 第60页 |
| 1.3.8 转基因烟草的Southern blot分析 | 第60-62页 |
| 1.3.9 转基因烟草旳病毒接种测试 | 第62页 |
| 2 结果与分析 | 第62-70页 |
| 2.1 GmTLP1植物表达载体的构建 | 第62-63页 |
| 2.2 GmTLP1转基因烟草的获得和阳性鉴定 | 第63-65页 |
| 2.3 GmTLP1转基因烟草的Southern blot分析 | 第65页 |
| 2.4 转基因烟草的病毒接种测试 | 第65-70页 |
| 3 讨论 | 第70-72页 |
| 全文结论 | 第72-74页 |
| 本研究创新之处 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-82页 |
| 附录 | 第82-88页 |
| 攻读硕士学位期间发表与待发表的文章 | 第88-90页 |
| 致谢 | 第90页 |
