| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 中英文对照和缩略语表 | 第13-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-45页 |
| ·引言 | 第15页 |
| ·无细胞蛋白表达系统简介 | 第15-21页 |
| ·无细胞表达体系的研发 | 第15-16页 |
| ·无细胞表达系统合成蛋白的机理 | 第16-18页 |
| ·常用无细胞体系抽提物的制备 | 第18-20页 |
| ·无细胞反应体系的优势和缺点 | 第20页 |
| ·无细胞表达体系的应用前景 | 第20-21页 |
| ·无细胞体系表达膜蛋白 | 第21-26页 |
| ·生物膜和膜蛋白 | 第21-23页 |
| ·无细胞体系表达膜蛋白 | 第23-26页 |
| ·细菌细胞壁和 MraY 转位酶 | 第26-38页 |
| ·细菌细胞壁的功能和结构 | 第26-27页 |
| ·细菌细胞壁与抗生素 | 第27-28页 |
| ·细菌肽聚糖的生物合成 | 第28-30页 |
| ·MraY 转位酶的功能 | 第30-32页 |
| ·MraY 转位酶的酶动力学 | 第32-33页 |
| ·MraY 转移酶的活性位点 | 第33-34页 |
| ·MraY 转位酶的催化机制 | 第34-36页 |
| ·磷脂在 MraY 转移酶催化反应的作用 | 第36-37页 |
| ·MraY 转移酶的天然产物抑制剂 | 第37-38页 |
| ·人类葡糖胺 6-磷酸 N-乙酰转移酶 | 第38-41页 |
| ·GNATs 蛋白家族 | 第38-39页 |
| ·葡糖胺 6-磷酸 N-乙酰转移酶功能 | 第39-40页 |
| ·葡糖胺 6-磷酸 N-乙酰转移酶结构 | 第40-41页 |
| ·绿色荧光蛋白 | 第41-44页 |
| ·绿色荧光蛋白的功能 | 第41页 |
| ·绿色荧光蛋白的理化性质 | 第41-42页 |
| ·绿色荧光蛋白的发光机理与结构 | 第42-43页 |
| ·绿色荧光蛋白的的分子改进 | 第43页 |
| ·绿色荧光蛋白在无细胞体系的应用 | 第43-44页 |
| ·本论文的主要内容及研究意义 | 第44-45页 |
| 第二章 材料与方法 | 第45-58页 |
| ·实验材料 | 第45-49页 |
| ·生物材料 | 第45页 |
| ·试剂和仪器 | 第45-46页 |
| ·培养基 | 第46页 |
| ·缓冲液和溶液 | 第46-49页 |
| ·实验方法 | 第49-58页 |
| ·DNA 模板的构建 | 第49-50页 |
| ·T7 RNA 聚合酶 (T7 RNAP) 的制备 | 第50-51页 |
| ·大肠杆菌 S30 抽提物的制备 | 第51-52页 |
| ·大肠杆菌无细胞体系的构建 | 第52-55页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第55-56页 |
| ·Western blotting 分析 | 第56页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第56-57页 |
| ·GFP 荧光强度测定 | 第57-58页 |
| 第三章 MraY 转位酶在无细胞体系的表达和纯化 | 第58-84页 |
| ·引言 | 第58-59页 |
| ·材料与方法 | 第59-70页 |
| ·实验材料 | 第59页 |
| ·实验方法 | 第59-70页 |
| ·结果与讨论 | 第70-83页 |
| ·Bs-MraY 和 Ec-MraY 拓扑结构分析 | 第70-71页 |
| ·Bs-MraY 基因和 Ec-MraY 基因的克隆与表达载体的构建 | 第71-73页 |
| ·Bs-MraY 基因和 Ec-MraY 基因在无细胞体系的表达 | 第73-81页 |
| ·MraY 转位酶的亲和层析 | 第81页 |
| ·讨论 | 第81-83页 |
| ·本章小结 | 第83-84页 |
| 第四章 MraY 转位酶的功能研究 | 第84-101页 |
| ·引言 | 第84-85页 |
| ·材料与方法 | 第85-86页 |
| ·实验材料 | 第85页 |
| ·实验方法 | 第85-86页 |
| ·结果与讨论 | 第86-99页 |
| ·P-CF 模式表达的 MraY 蛋白的均质性和稳定性 | 第86-88页 |
| ·无细胞体系表达的 MraY 蛋白的功能表征 | 第88-93页 |
| ·MraY 蛋白在无细胞体系表达的表达动力学 | 第93-95页 |
| ·Bs-MraY 蛋白酶促反应动力学 | 第95页 |
| ·衣霉素对 Bs-MraY 转位酶的抑制 | 第95-96页 |
| ·讨论 | 第96-99页 |
| ·本章小结 | 第99-101页 |
| 第五章 GNA1 转移酶及融合蛋白在无细胞体系的表达和纯化 | 第101-118页 |
| ·引言 | 第101-102页 |
| ·材料与方法 | 第102-108页 |
| ·实验材料 | 第102页 |
| ·实验方法 | 第102-108页 |
| ·结果与讨论 | 第108-116页 |
| ·GNA1 基因和 sGFP 基因的克隆与表达载体的构建 | 第108-110页 |
| ·GNA1 和 GNA1-sGFP 蛋白在无细胞体系的表达和优化 | 第110-112页 |
| ·GNA1-sGFP 融合蛋白的表达动力学 | 第112页 |
| ·GNA1 蛋白的亲和层析 | 第112-113页 |
| ·GNA1 蛋白的二级结构和热稳定性 | 第113-115页 |
| ·GNA1 蛋白的分子筛层析 | 第115页 |
| ·讨论 | 第115-116页 |
| ·本章小结 | 第116-118页 |
| 第六章 GNA1 转移酶及融合蛋白的功能研究 | 第118-127页 |
| ·引言 | 第118页 |
| ·材料与方法 | 第118-120页 |
| ·实验材料 | 第118-119页 |
| ·实验方法 | 第119-120页 |
| ·结果与讨论 | 第120-126页 |
| ·标准曲线制作 | 第120-121页 |
| ·GNA1 转移酶的功能表征 | 第121-123页 |
| ·G6P 对 GNA1 转移酶和 GNA1-sGFP 融合蛋白的抑制作用 | 第123-125页 |
| ·讨论 | 第125-126页 |
| ·本章小结 | 第126-127页 |
| 结论 | 第127-131页 |
| 参考文献 | 第131-152页 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第152-154页 |
| 致谢 | 第154-156页 |
| 附件 | 第156页 |
