| 缩略词表 | 第5-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第一章 绪论 | 第11-32页 |
| 1.1 蛋白质翻译后修饰 | 第11-12页 |
| 1.2 肿瘤细胞代谢 | 第12-14页 |
| 1.3 PKM2对肿瘤代谢的调控 | 第14-27页 |
| 1.3.1 丙酮酸激酶的催化特性及亚型分析 | 第15-16页 |
| 1.3.2 PKM2基因的转录调控 | 第16-17页 |
| 1.3.3 PKM2蛋白的结构特征 | 第17-19页 |
| 1.3.4 PKM2与肿瘤的相关性 | 第19页 |
| 1.3.5 PKM2与“温伯格效应” | 第19-25页 |
| 1.3.5.1 PKM2活性的调控机制 | 第20-24页 |
| 1.3.5.1.1 小分子以及氨基酸对PKM2活性与功能的调控 | 第21-22页 |
| 1.3.5.1.2 显性负突变对PKM2活性与功能的调控 | 第22-23页 |
| 1.3.5.1.3 翻译后修饰对PKM2活性与功能的调控 | 第23-24页 |
| 1.3.5.2 PKM2调控肿瘤代谢 | 第24-25页 |
| 1.3.6 PKM2的蛋白激酶功能 | 第25-27页 |
| 1.4 丙酮酸激酶的变构调控 | 第27-30页 |
| 1.4.1 墨西哥利什曼原虫丙酮酸激酶的变构调控 | 第27-28页 |
| 1.4.2 人源丙酮酸激酶PKM2的变构调控 | 第28-30页 |
| 1.5 本课题的创新点及研究意义 | 第30-32页 |
| 第二章 材料与方法 | 第32-46页 |
| 2.1 实验仪器与试剂 | 第32-38页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第32-33页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第33-37页 |
| 2.1.3 实验材料 | 第37-38页 |
| 2.2 分子克隆实验方法 | 第38-40页 |
| 2.2.1 克隆构建 | 第38-39页 |
| 2.2.2 点突变设计 | 第39-40页 |
| 2.2.3 小管表达测试 | 第40页 |
| 2.3 蛋白表达纯化 | 第40-41页 |
| 2.3.1 蛋白表达 | 第40页 |
| 2.3.2 蛋白纯化 | 第40-41页 |
| 2.3.2.1 细胞破碎 | 第40页 |
| 2.3.2.2 亲和层析及柱上酶切 | 第40-41页 |
| 2.3.2.3 凝胶过滤层析 | 第41页 |
| 2.4 晶体生长与优化 | 第41-42页 |
| 2.4.1 晶体初筛 | 第41页 |
| 2.4.2 晶体优化 | 第41-42页 |
| 2.4.3 晶体的处理 | 第42页 |
| 2.5 数据收集与结构解析 | 第42-43页 |
| 2.5.1 衍射数据收集与处理 | 第42-43页 |
| 2.5.2 结构解析 | 第43页 |
| 2.6 丙酮酸激酶体外酶活实验 | 第43-44页 |
| 2.7 凝胶过滤层析实验 | 第44页 |
| 2.8 热稳定性检测TSA实验 | 第44-46页 |
| 第三章 PKM2突变体蛋白的体外理化性质分析及结构生物学研究 | 第46-67页 |
| 3.1 PKM2突变体构建 | 第46页 |
| 3.2 PKM2本体及突变体蛋白的体外酶活、理化性质分析 | 第46-53页 |
| 3.2.1 PKM2本体及突变体蛋白的体外酶活检测 | 第46-49页 |
| 3.2.2 PKM2本体及突变体蛋白的聚合状态检测 | 第49-51页 |
| 3.2.3 PKM2本体蛋白及突变体蛋白热稳定性分析 | 第51-53页 |
| 3.3 PKM2突变体蛋白的纯化与结晶 | 第53-57页 |
| 3.3.1 PKM2突变体蛋白的纯化 | 第53-56页 |
| 3.3.2 突变体蛋白晶体的筛选与优化 | 第56-57页 |
| 3.4 突变体晶体的衍射数据收集与结构解析 | 第57-66页 |
| 3.4.1 突变体Y105E晶体的衍射数据收集与结构解析 | 第57-59页 |
| 3.4.2 突变体K305Q晶体的衍射数据收集与结构解析 | 第59-61页 |
| 3.4.3 突变体R399E晶体的衍射数据收集与结构解析 | 第61-63页 |
| 3.4.4 突变体K422R晶体的衍射数据收集与结构解析 | 第63-65页 |
| 3.4.5 作图 | 第65-66页 |
| 3.5 本章小结 | 第66-67页 |
| 第四章 PKM2突变体结构分析 | 第67-87页 |
| 4.1 PKM2突变体的晶体结构 | 第67-68页 |
| 4.2 PKM2的R-state与T-state之间的构象转换 | 第68-76页 |
| 4.3 突变体Y105E抑制FBP诱导的R-state四聚体的形成 | 第76-79页 |
| 4.4 突变体K305Q破坏PKM2四聚体形成并影响其酶活 | 第79-80页 |
| 4.5 突变体K422R的稳定的T-state构象 | 第80-83页 |
| 4.6 突变体R399E的R-state四聚体形成受阻 | 第83-84页 |
| 4.7 翻译后修饰及显性负突变调控PKM2构象的工作模型 | 第84-86页 |
| 4.8 本章小结 | 第86-87页 |
| 第五章 结果与讨论 | 第87-90页 |
| 第六章 结论与展望 | 第90-92页 |
| 6.1 结论 | 第90页 |
| 6.2 展望 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-102页 |
| 附录：解析的结构列表 | 第102-103页 |
| 博士期间发表论文及基金资助 | 第103-106页 |
| 致谢 | 第106-107页 |
