| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 1 引言 | 第15-28页 |
| 1.1 mi RNA的研究进展 | 第15-19页 |
| 1.1.1 mi RNAs的提出及命名 | 第15页 |
| 1.1.2 mi RNAs的形成及其作用机制的研究 | 第15-17页 |
| 1.1.3 mi RNA 的检测 | 第17-18页 |
| 1.1.4 mi RNAs的鉴定及研究手段 | 第18页 |
| 1.1.5 mi RNAs靶基因寻找及鉴定的研究 | 第18-19页 |
| 1.2 泌乳生物学的研究现状 | 第19-22页 |
| 1.2.1 乳腺泌乳的过程 | 第20页 |
| 1.2.2 乳腺泌乳的调节 | 第20-22页 |
| 1.3 mi RNAs在乳腺发育及泌乳中的研究 | 第22-23页 |
| 1.4 mi R-29家族的研究进展 | 第23-24页 |
| 1.5 DNA甲基化及其在乳腺中的研究 | 第24-27页 |
| 1.5.1 DNA甲基化的作用机制 | 第24-25页 |
| 1.5.2 甲基转移酶DNMT3A及DNMT3B的研究进展 | 第25-26页 |
| 1.5.3 DNA甲基化在乳腺中的研究 | 第26-27页 |
| 1.6 研究的目的和意义 | 第27-28页 |
| 2 材料与方法 | 第28-51页 |
| 2.1 实验材料 | 第28页 |
| 2.2 实验主要试剂 | 第28-29页 |
| 2.3 实验仪器 | 第29-30页 |
| 2.4 实验方法 | 第30-50页 |
| 2.4.1 mi R-29家族在不同乳品质奶牛乳腺组织中的表达 | 第30-31页 |
| 2.4.2 mi R-29s靶基因的预测与分析 | 第31-32页 |
| 2.4.3 DNMT3A和-3B在不同乳品质奶牛乳腺组织中的表达与定位 | 第32-35页 |
| 2.4.4 细胞的培养与鉴定 | 第35-36页 |
| 2.4.5 免疫荧光检测DNMT3A、-3B在DCMECs中的定位表达 | 第36页 |
| 2.4.6 mi R-29s靶基因Dnmt3a及Dnmt3b的鉴定 | 第36-41页 |
| 2.4.7 mi R-29s基因超表达对奶牛乳腺上皮细胞的影响 | 第41-44页 |
| 2.4.8 5-Aza-dc作用DCMECs后对泌乳相关基因m RNA表达的影响 | 第44-45页 |
| 2.4.9 mi R-29s基因沉寂对奶牛乳腺上皮细胞的影响 | 第45-50页 |
| 2.4.10 5-Aza-dc作用DCMECs后对mi R-29s表达的影响 | 第50页 |
| 2.5 数据的统计及分析 | 第50-51页 |
| 3 结果 | 第51-100页 |
| 3.1 mi R-29s在不同乳品质奶牛乳腺组织中的表达 | 第51-53页 |
| 3.1.1 不同乳品质奶牛乳腺组织中RNA质量的检测 | 第51-52页 |
| 3.1.2 小RAN测序发现mi R-29s在不同乳品质乳腺组织中的差异表达 | 第52页 |
| 3.1.3 q RT-PCR检测mi R-29s在不同乳品质奶牛乳腺组织中的表达 | 第52-53页 |
| 3.2 mi R-29s靶基因的预测 | 第53页 |
| 3.3 DNMT3A /3B在不同乳品质奶牛乳腺组织中的表达及定位 | 第53-57页 |
| 3.3.1 Dnmt3a/-3b在不同乳品质奶牛乳腺组织中m RNA的表达 | 第53-54页 |
| 3.3.2 DNMT3A/3B在不同乳品质奶牛乳腺组织中蛋白的表达及定位 | 第54-57页 |
| 3.4 细胞培养及奶牛乳腺上皮细胞泌乳功能鉴定 | 第57-59页 |
| 3.5 DNMT3A及-3B在奶牛乳腺上皮细胞内定位的观察 | 第59-60页 |
| 3.6 mi R-29s靶基因Dnmt3a及-3b的鉴定 | 第60-64页 |
| 3.6.1 融合Dnmt3a、-3b 3′UTR的报告基因载体的构建 | 第60-61页 |
| 3.6.2 融合Dnmt3a、-3b 3′UTR的EGFP载体的构建 | 第61-62页 |
| 3.6.3 荧光素酶活性的检测 | 第62-63页 |
| 3.6.4 绿色荧光蛋白EGFP表达的检测 | 第63-64页 |
| 3.7 mi R-29s超表达对奶牛乳腺上皮细胞的影响 | 第64-74页 |
| 3.7.1 q RT-PCR检测mi R-29s mimics转染DCMECs后mi R-29s的表达 | 第64-65页 |
| 3.7.2 mi R-29s超表达对靶基因Dnmt3a及-3b m RNA表达的影响 | 第65-66页 |
| 3.7.3 mi R-29s超表达对DNMT3A及-3B蛋白表达的影响 | 第66-67页 |
| 3.7.4 mi R-29s超表达对DCMECs基因组GDM及甲基化酶活性的影响 | 第67-68页 |
| 3.7.5 mi R-29s超表达对DCMECs泌乳相关信号通路基因表达的影响 | 第68页 |
| 3.7.6 mi R-29s超表达对DCMECs泌乳相关信号通路蛋白表达的影响 | 第68-69页 |
| 3.7.7 mi R-29s超表达对DCMECs活性及增殖能力的影响 | 第69-71页 |
| 3.7.8 mi R-29s超表达对?-酪蛋白表达和分泌的影响 | 第71-73页 |
| 3.7.9 mi R-29s超表达对细胞甘油三酯分泌的影响 | 第73页 |
| 3.7.10 mi R-29s超表达对细胞乳糖分泌的影响 | 第73-74页 |
| 3.8 mi R-29s基因沉寂对奶牛乳腺上皮细胞的影响 | 第74-97页 |
| 3.8.1 q RT-PCR检测mi R-29s抑制子转染DCMECs后mi R-29s的表达 | 第74页 |
| 3.8.2 mi R-29s沉寂对靶基因Dnmt3a及-3b m RNA表达的影响 | 第74-75页 |
| 3.8.3 mi R-29s沉寂对DNMT3A及-3B蛋白表达的影响 | 第75-76页 |
| 3.8.4 mi R-29s沉寂对DCMECs基因组GDM及甲基化酶活性的影响 | 第76-77页 |
| 3.8.5 mi R-29s沉寂对DCMECs泌乳相关信号通路基因表达的影响 | 第77-78页 |
| 3.8.6 mi R-29s沉寂对DCMECs泌乳相关信号通路蛋白表达的影响 | 第78-79页 |
| 3.8.7 BSP分析mi R-29b沉寂后对泌乳相关基因启动子甲基化的影响 | 第79-88页 |
| 3.8.8 5-Aza-dc作用DCMECs后对泌乳相关基因m RAN表达的影响 | 第88-92页 |
| 3.8.9 mi R-29s沉寂对DCMECs活性及增殖能力的影响 | 第92-93页 |
| 3.8.10 mi R-29s沉寂对?-酪蛋白表达和分泌的影响 | 第93-95页 |
| 3.8.11 mi R-29s沉寂对细胞甘油三酯分泌的影响 | 第95-96页 |
| 3.8.12 mi R-29s沉寂对细胞乳糖分泌的影响 | 第96-97页 |
| 3.9 DNA甲基化对DCMECs中mi R-29s表达的影响 | 第97-100页 |
| 3.9.1 5-Aza-dc作用奶牛乳腺上皮细胞后对mi R-29s表达的影响 | 第97-98页 |
| 3.9.2 5-Aza-dc作用DCMECs后对mi R-29b启动子甲基化水平的影响 | 第98-100页 |
| 4 讨论 | 第100-109页 |
| 4.1 mi R-29s在不同乳品质奶牛乳腺组织中的差异表达 | 第100-101页 |
| 4.2 mi R-29s靶基因的预测及鉴定 | 第101-102页 |
| 4.3 mi R-29s对DCMECs DNA甲基化的影响 | 第102-103页 |
| 4.4 mi R-29s对DCMECs泌乳相关基因表达的影响及其作用机制 | 第103-106页 |
| 4.5 mi R-29s对DCMECs增殖和活性的影响 | 第106页 |
| 4.6 mi R-29s对DCMECs泌乳功能的影响 | 第106-107页 |
| 4.7 5-Aza-dc对DCMECs中mi R-29s表达的影响 | 第107-108页 |
| 4.8 mi R-29s调控DCMECs泌乳示意图 | 第108-109页 |
| 5 结论 | 第109-110页 |
| 致谢 | 第110-111页 |
| 参考文献 | 第111-123页 |
| 附录 | 第123-124页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第124页 |
