中文摘要 | 第3-7页 |
英文摘要 | 第7-12页 |
主要缩略词 | 第17-18页 |
1 绪论 | 第18-30页 |
1.1 问题的提出及研究意义 | 第18页 |
1.2 国内外研究现状 | 第18-27页 |
1.2.1 极低频电磁场暴露和健康效应 | 第19-21页 |
1.2.2 射低频电磁场暴露和健康效应 | 第21-23页 |
1.2.3 EMF影响雄性生殖健康的可能机制 | 第23-26页 |
1.2.4 电磁场与表观遗传学 | 第26-27页 |
1.3 本文的研究目的和内容 | 第27-30页 |
1.3.1 研究目的 | 第27-28页 |
1.3.2 研究内容 | 第28-29页 |
1.3.3 本文的创新点 | 第29-30页 |
2 50 Hz ELF-EMF对DNA甲基化的影响研究 | 第30-64页 |
2.1 引言 | 第30页 |
2.2 实验材料 | 第30-32页 |
2.2.1 实验细胞 | 第30-32页 |
2.3 实验方法 | 第32-43页 |
2.3.1 细胞培养与ELF-EMF暴露 | 第32-33页 |
2.3.2 CCK-8 法检测细胞生长 | 第33页 |
2.3.3 流式细胞仪测细胞凋亡率 | 第33-34页 |
2.3.4 流式细胞仪检测细胞周期 | 第34页 |
2.3.5 全基因组甲基化检测 | 第34-35页 |
2.3.6 基因表达的检测 | 第35-38页 |
2.3.7 Western Blot法检测蛋白的表达水平 | 第38-39页 |
2.3.8 基因芯片及其验证 | 第39页 |
2.3.9 MSP验证DNA甲基化修饰异常基因 | 第39-42页 |
2.3.10 统计学分析 | 第42-43页 |
2.4 实验结果 | 第43-59页 |
2.4.1 50 Hz ELF-EMF不会影响GC-2 细胞生长 | 第43-44页 |
2.4.2 50 Hz ELF-EMF对GC-2 细胞凋亡和细胞周期的影响 | 第44-48页 |
2.4.3 50 Hz ELF-EMF对GC-2 细胞全基因组甲基化水平的影响 | 第48页 |
2.4.4 50 Hz ELF-EMF对GC-2 细胞DNMTs表达水平的影响 | 第48-51页 |
2.4.5 50 Hz ELF-EMF暴露后DNA甲基化差异分析 | 第51-54页 |
2.4.6 50 Hz ELF-EMF暴露后基因表达分析 | 第54-57页 |
2.4.7 网络分析 | 第57-59页 |
2.5 讨论 | 第59-62页 |
2.6 本章小结 | 第62-64页 |
3 50 Hz ELF-EMF影响miRNA介导的GC-2 细胞中信号通路的调控 | 第64-106页 |
3.1 引言 | 第64页 |
3.2 实验材料 | 第64-66页 |
3.2.1 实验细胞 | 第64页 |
3.2.2 主要实验仪器和耗材 | 第64-65页 |
3.2.3 主要试剂 | 第65-66页 |
3.3 实验方法 | 第66-70页 |
3.3.1 细胞培养与ELF-EMF暴露 | 第66页 |
3.3.2 RNA逆转录miRNA | 第66页 |
3.3.3 反转录miRNA第一条链 | 第66页 |
3.3.4 miRNA qPCR反应 | 第66-67页 |
3.3.5 miRNA表达谱芯片 | 第67页 |
3.3.6 MSP检测宿主基因启动子甲基化状态 | 第67-68页 |
3.3.7 细胞转染 | 第68-69页 |
3.3.8 CCK-8 法检测转染后细胞生长 | 第69页 |
3.3.9 流式细胞仪测细胞凋亡率和细胞周期 | 第69页 |
3.3.10 Western Blot法检测蛋白的表达水平 | 第69页 |
3.3.11 靶基因预测 | 第69-70页 |
3.3.12 统计学分析 | 第70页 |
3.4 实验结果 | 第70-101页 |
3.4.1 50 Hz ELF-EMF暴露可以诱导miRNA差异表达 | 第70-74页 |
3.4.2 定量PCR验证 50 Hz ELF-EMF暴露后差异表达miRNAs | 第74-77页 |
3.4.3 网络分析 | 第77-78页 |
3.4.4 50 Hz ELF-EMF不同强度暴露后核心miRNA的表达验证 | 第78-79页 |
3.4.5 50 Hz ELF-EMF介导潜在的miRNA的靶基因和功能分析 | 第79-81页 |
3.4.6 基于miRNA的表达谱GO和KEGG分析 | 第81-85页 |
3.4.7 不同的场强的ELF-EMF能改变GC-2 细胞中miR-26b-5p的表达 | 第85-87页 |
3.4.8 50 Hz ELF-EMF暴露并不会改变的miR-26b-5p宿主基因CTDSP1启动子的甲基化状态 | 第87-88页 |
3.4.9 miR-26b-5p对GC-2 细胞的生长无明显影响 | 第88-90页 |
3.4.10 miR-26b-5p过表达或者沉默不影响GC-2 细胞凋亡和引起细胞周期阻滞 | 第90-92页 |
3.4.11 过表达miR-26b-5p再暴露于 3 mT ELF-EMF对细胞生长的影响 | 第92-93页 |
3.4.12 过表达miR-26b-5p再暴露于 3 mT ELF-EMF对细胞凋亡和周期的影响 | 第93-97页 |
3.4.13 CCND2是mi R-26b-5p的直接调控的靶基因 | 第97-99页 |
3.4.14 50 Hz ELF-EMF可以改变CCND2 mRNA和蛋白的表达 | 第99-100页 |
3.4.15 3 mT ELF-EMF暴露条件下,过表达miR-26b-5p可以改变GC-2 细胞中CCND2表达 | 第100-101页 |
3.5 讨论 | 第101-106页 |
4 1800 MHz RF-EMF对DNA甲基化的影响研究 | 第106-126页 |
4.1 引言 | 第106页 |
4.2 实验材料 | 第106-108页 |
4.2.1 实验细胞 | 第106页 |
4.2.2 主要实验设备 | 第106-108页 |
4.3 实验方法 | 第108-113页 |
4.3.1 细胞培养与RF-EMF暴露 | 第108-109页 |
4.3.2 CCK8法检测转染后细胞生长 | 第109页 |
4.3.3 流式细胞仪测细胞凋亡率 | 第109页 |
4.3.4 流式细胞仪检测细胞周期 | 第109页 |
4.3.5 基因表达的检测 | 第109-110页 |
4.3.6 全基因组甲基化检测 | 第110-111页 |
4.3.7 Western Blot 法检测蛋白的表达水平 | 第111页 |
4.3.8 基因芯片及其验证 | 第111-113页 |
4.3.9 统计学分析 | 第113页 |
4.4 实验结果 | 第113-121页 |
4.4.1 1800 MHz RF-EMF不影响GC-2 细胞生长 | 第113-115页 |
4.4.2 1800 MHz RF-EMF不会诱导GC-2 细胞凋亡或细胞周期阻滞 | 第115-118页 |
4.4.3 1800 MHz RF-EMF可以增加GC-2 细胞全基因组甲基化水平 | 第118-119页 |
4.4.4 1800 MHz RF-EMF可改变DNMTsmRNA和蛋白水平的表达 | 第119-120页 |
4.4.5 初步建立了 1800MHz RF-EMF致全基因组甲基化图谱 | 第120-121页 |
4.5 讨论 | 第121-124页 |
4.6 本章小结 | 第124-126页 |
5 1800 MHz RF-EMF对miRNA的影响研究 | 第126-152页 |
5.1 引言 | 第126页 |
5.2 实验材料 | 第126-128页 |
5.2.1 实验细胞 | 第126页 |
5.2.2 主要实验设备 | 第126-128页 |
5.3 实验方法 | 第128-130页 |
5.3.1 细胞培养与RF-EMF暴露 | 第128页 |
5.3.2 基因表达的检测 | 第128-130页 |
5.3.3 基因芯片及其验证 | 第130页 |
5.3.4 统计学分析 | 第130页 |
5.4 实验结果 | 第130-147页 |
5.4.1 1800 MHz RF-EMF暴露可以诱导的miRNA的差异表达 | 第130-132页 |
5.4.2 qPCR验证差异表达的核心的miRNA | 第132-133页 |
5.4.3 1800 MHz RF-EMF潜在的特异的miRNA的靶基因和功能分析 | 第133页 |
5.4.4 基因表达谱芯片筛选 1800 MHz RF-EMF暴露后差异表达基因 | 第133-135页 |
5.4.5 Signal-Net分析预测核心靶基因 | 第135-136页 |
5.4.6 microRNA-Gene-Network | 第136-139页 |
5.4.7 基于mRNA表达谱GO分析和KEGG通路分析 | 第139-144页 |
5.4.8 相关信号通路的验证 | 第144-147页 |
5.5 讨论 | 第147-150页 |
5.6 本章小结 | 第150-152页 |
6 结论与展望 | 第152-156页 |
6.1 主要结论 | 第152-153页 |
6.1.1 50 Hz ELF-EMF的表观遗传学研究 | 第152页 |
6.1.2 1800 MHz RF-EMF的表观遗传学研究 | 第152-153页 |
6.2 展望 | 第153-156页 |
致谢 | 第156-158页 |
参考文献 | 第158-174页 |
附录 | 第174页 |
A. 作者在攻读博士学位期间科研及发表论文情况 | 第174页 |
B. 参加的科研项目情况 | 第174页 |