| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 一 引言 | 第9-22页 |
| 1.1 睾丸形态、结构及精原干细胞库的起源 | 第9-10页 |
| 1.2 精子发生及精子发生谱系的发育 | 第10-11页 |
| 1.3 生精上皮周期和生精上皮波 | 第11-12页 |
| 1.4 SSCs微生境(Niche) | 第12-17页 |
| 1.4.1 旁分泌和自分泌因素对精子发生的调控 | 第13页 |
| 1.4.2 精子发生过程中细胞间的相互作用 | 第13-17页 |
| 1.5 SSCs的实验研究策略 | 第17-19页 |
| 1.5.1 SSCs移植 | 第17-18页 |
| 1.5.2 SSCs的分子表型 | 第18-19页 |
| 1.5.3 SSCs细胞培养 | 第19页 |
| 1.6 体外诱导SSC的精子发生 | 第19-20页 |
| 1.7 SSC诱导的多能性干细胞 | 第20页 |
| 1.8 结语 | 第20-22页 |
| 二、实验材料与方法 | 第22-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-26页 |
| 2.1.1 实验仪器、耗材 | 第22-23页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.3 实验动物 | 第24页 |
| 2.1.4 重要溶液(培养液)的配置 | 第24-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-32页 |
| 2.2.1 精原干细胞建系培养 | 第26-29页 |
| 2.2.1.1 制备乳鼠睾丸细胞悬液 | 第26页 |
| 2.2.1.2 30%Percoll密度梯度离心 | 第26-27页 |
| 2.2.1.3 MACS分离小鼠精原于细胞 | 第27页 |
| 2.2.1.4 STO饲养层制备 | 第27-28页 |
| 2.2.1.5 精原干细胞的原代培养 | 第28页 |
| 2.2.1.6 精原干细胞的传代培养 | 第28页 |
| 2.2.1.7 细胞冻存、复苏 | 第28-29页 |
| 2.2.2 精原干细胞鉴定 | 第29-32页 |
| 2.2.2.1 碱性磷酸酶染色鉴定 | 第29页 |
| 2.2.2.2 免疫荧光染色鉴定 | 第29页 |
| 2.2.2.3 核型分析 | 第29-30页 |
| 2.2.2.4 精原干细胞移植(睾丸网注射法)鉴定 | 第30-31页 |
| 2.2.2.5 石错包埋、切片 | 第31-32页 |
| 2.2.2.6 HE 染色 | 第32页 |
| 2.3 制备睾丸ECM和建立睾丸细胞3D体外培养体系 | 第32-34页 |
| 三、结果与分析 | 第34-45页 |
| 3.1 细胞培养结果 | 第34-36页 |
| 3.2 碱性磷酸酶染色 | 第36-37页 |
| 3.3 SSC特异性标记的免疫荧光鉴定 | 第37-38页 |
| 3.4 体外培养的精原干细胞系染色体数目和核型分析 | 第38-39页 |
| 3.5 移植分析 | 第39-41页 |
| 3.5.1 白硝铵处理受体睾丸组织学分析结果 | 第39-40页 |
| 3.5.2 移植结果 | 第40-41页 |
| 3.6 3D培养结果 | 第41-45页 |
| 3.6.1 睾丸组织支架的组织学分析结果 | 第41-42页 |
| 3.6.2 睾丸组织3D培养体系培养结果 | 第42-45页 |
| 四 讨论 | 第45-47页 |
| 五 结论 | 第47-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-52页 |
