| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略语/符号说明 | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-18页 |
| 研究现状、成果 | 第12-17页 |
| 研究目的、方法 | 第17-18页 |
| 一、GLP~n串联体的体外表达 | 第18-45页 |
| 1.1 对象和方法 | 第18-35页 |
| 1.1.1 试剂与耗材 | 第18-22页 |
| 1.1.2 实验流程 | 第22-23页 |
| 1.1.3 克隆载体的构建 | 第23-30页 |
| 1.1.4 表达载体的构建 | 第30-32页 |
| 1.1.5 多拷贝GLP诱导表达及条件优化 | 第32-35页 |
| 1.2 结果 | 第35-39页 |
| 1.2.1 克隆载体pMD-18T-GLPn | 第35页 |
| 1.2.2 表达载体pET-22b-GLPn | 第35-36页 |
| 1.2.3 诱导时间对GLPn表达的影响 | 第36-37页 |
| 1.2.4 温度对GLPn表达的影响 | 第37-38页 |
| 1.2.5 诱导剂浓度对GLPn表达的影响 | 第38-39页 |
| 1.2.6 GLP拷贝数对GLPn表达的影响 | 第39页 |
| 1.3 讨论 | 第39-43页 |
| 1.3.1 GLP-1 串联体和GLP-1 类似蛋白 | 第39-40页 |
| 1.3.2 关于GLP12和GLP16不表达的可能原因 | 第40-41页 |
| 1.3.3 表达条件的优化 | 第41页 |
| 1.3.4 外源蛋白在大肠杆菌中的定位 | 第41-42页 |
| 1.3.5 GLP-1 类似物的展望 | 第42-43页 |
| 1.4 小结 | 第43-45页 |
| 二、原代大鼠小肠上皮细胞体外分离培养 | 第45-63页 |
| 2.1 对象和方法 | 第46-56页 |
| 2.1.1 实验对象与材料 | 第46-48页 |
| 2.1.2 原代大鼠小肠上皮细胞的分离 | 第48页 |
| 2.1.3 测定细胞增殖曲线 | 第48-49页 |
| 2.1.4 荧光免疫法鉴定上皮细胞 | 第49-50页 |
| 2.1.5 利用gateway系统构建hrGFP慢病毒载体 | 第50-56页 |
| 2.2 结果 | 第56-59页 |
| 2.2.1 小肠上皮细胞原代分离 | 第56页 |
| 2.2.2 细胞形态学观察 | 第56-57页 |
| 2.2.3 小肠上皮细胞增殖能力检测 | 第57页 |
| 2.2.4 小肠上皮细胞的荧光免疫鉴定 | 第57-58页 |
| 2.2.5 慢病毒滴度测定 | 第58-59页 |
| 2.2.6 hrGFP慢病毒转染小肠上皮细胞 | 第59页 |
| 2.3 讨论 | 第59-62页 |
| 2.3.1 大鼠小肠上皮细胞分离方法的对比 | 第60页 |
| 2.3.2 大鼠小肠上皮细胞的纯度 | 第60-61页 |
| 2.3.3 关于分散细胞的贴壁 | 第61页 |
| 2.3.4 培养条件的优化 | 第61-62页 |
| 2.3.5 Gateway系统构建慢病毒表达载体 | 第62页 |
| 2.4 小结 | 第62-63页 |
| 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-68页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第68-69页 |
| 综述 GLP-1 概述及其类似物的在糖尿病治疗领域的应用 | 第69-81页 |
| 综述参考文献 | 第75-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 个人简历 | 第82页 |
