| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 引言 | 第11-18页 |
| 1 甘露糖受体家族简介 | 第11-13页 |
| 2 Ly75的研究进展 | 第13-15页 |
| 2.1 Ly75的发现及命名 | 第13页 |
| 2.2 Ly75的结构 | 第13页 |
| 2.3 Ly75的表达 | 第13-14页 |
| 2.4 Ly75的功能 | 第14-15页 |
| 2.5 鱼类Ly75的研究进展 | 第15页 |
| 3 本研究目的意义及技术路线 | 第15-18页 |
| 3.1 本研究的目的意义 | 第15-16页 |
| 3.2 本研究的技术路线 | 第16-18页 |
| 第一章 尼罗罗非鱼Ly75基因的克隆及组织表达分析 | 第18-51页 |
| 1 实验材料 | 第19-21页 |
| 1.1 实验用鱼 | 第19页 |
| 1.2 实验试剂 | 第19-21页 |
| 1.2.1 采购试剂 | 第19页 |
| 1.2.2 配制试剂 | 第19-21页 |
| 1.3 实验仪器 | 第21页 |
| 2 实验方法 | 第21-33页 |
| 2.1 基因克隆的引物设计 | 第21-22页 |
| 2.2 尼罗罗非鱼各组织总RNA提取 | 第22-23页 |
| 2.3 cDNA合成 | 第23-25页 |
| 2.3.1 8.5 天尼罗罗非鱼总cDNA制备 | 第23页 |
| 2.3.2 RACE-Ready cDNA的制备 | 第23-25页 |
| 2.3.3 qPCR cDNA的制备 | 第25页 |
| 2.4 On Ly75基因cDNA序列的克隆 | 第25-26页 |
| 2.4.1 On Ly75 cDNA中间片段扩增 | 第25-26页 |
| 2.4.2 On Ly75 cDNA 5’和 3’RACE | 第26页 |
| 2.5 琼脂糖凝胶纯化PCR扩增片段 | 第26-27页 |
| 2.6 PCR纯化产物的连接 | 第27页 |
| 2.7 连接产物的转化 | 第27-28页 |
| 2.8 阳性菌落检测 | 第28页 |
| 2.9 生物信息学分析 | 第28-29页 |
| 2.10 OnLy75基因在健康尼罗罗非鱼中的组织表达分析 | 第29-30页 |
| 2.10.1 qPCR引物设计 | 第29页 |
| 2.10.2 qPCR的模板cDNA准备 | 第29页 |
| 2.10.3 qPCR的质粒构建 | 第29页 |
| 2.10.4 健康组织表达分析 | 第29-30页 |
| 2.11 OnLy75精巢组织原位杂交分析 | 第30-33页 |
| 2.11.1 原位杂交RNA探针制备 | 第30-31页 |
| 2.11.2 冰冻切片的制备 | 第31页 |
| 2.11.3 原位杂交 | 第31-33页 |
| 3 结果 | 第33-49页 |
| 3.1 On Ly75 cDNA的克隆和序列分析 | 第33-40页 |
| 3.2 氨基酸序列同源性和系统进化树构建 | 第40-45页 |
| 3.3 目的基因的标准曲线和溶解曲线 | 第45-47页 |
| 3.4 On Ly75基因在健康尼罗罗非鱼不同组织中的表达分析 | 第47-48页 |
| 3.5 原位杂交结果 | 第48-49页 |
| 4 讨论 | 第49-51页 |
| 第二章 尼罗罗非鱼Ly75基因的原核表达和多克隆抗体制备 | 第51-64页 |
| 1 材料 | 第51-53页 |
| 1.1 实验动物 | 第51页 |
| 1.2 主要试剂 | 第51-53页 |
| 1.2.1 采购试剂 | 第51页 |
| 1.2.2 配制试剂 | 第51-53页 |
| 2 实验方法 | 第53-58页 |
| 2.1 On Ly75原核表达重组质粒构建 | 第53页 |
| 2.2 重组蛋白的诱导表达和SDS-PAGE分析 | 第53-55页 |
| 2.2.1 重组蛋白的诱导表达 | 第53-54页 |
| 2.2.2 SDS-PAGE检测重组蛋白表达情况 | 第54-55页 |
| 2.3 重组蛋白诱导表达的菌株筛选 | 第55页 |
| 2.4 重组蛋白诱导表达条件优化 | 第55页 |
| 2.4.1 诱导时间优化 | 第55页 |
| 2.4.2 IPTG浓度优化 | 第55页 |
| 2.5 重组蛋白纯化 | 第55-56页 |
| 2.5.1 重组蛋白包涵体复性 | 第55-56页 |
| 2.5.2 重组蛋白纯化 | 第56页 |
| 2.6 兔抗On Ly75多克隆抗体的制备 | 第56页 |
| 2.7 Westem blot检测抗体特异性 | 第56-58页 |
| 2.7.1 各组织总蛋白提取 | 第56-57页 |
| 2.7.2 Westem blot分析 | 第57-58页 |
| 3 结果与分析 | 第58-61页 |
| 3.1 原核表达 | 第58-59页 |
| 3.2 菌株筛选 | 第59页 |
| 3.3 重组蛋白表达条件优化 | 第59-60页 |
| 3.4 多克隆抗体制备 | 第60-61页 |
| 4 讨论 | 第61-64页 |
| 4.1 原核表达载体构建 | 第61-62页 |
| 4.2 诱导表达条件优化 | 第62页 |
| 4.3 包涵体的形成 | 第62-63页 |
| 4.4 多克隆抗体制备 | 第63-64页 |
| 小结 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-72页 |
| 附录 | 第72-73页 |
| 附录一 课题资助情况 | 第72页 |
| 附录二 论文发表情况 | 第72页 |
| 附录三 参加会议情况 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
