| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略语/符号说明 | 第10-11页 |
| 前言 | 第11-14页 |
| 研究现状、成果 | 第11-13页 |
| 研究目的、方法 | 第13-14页 |
| 一、TNF-α刺激髓核细胞建立凋亡模型及刺激后miR-494表达情况 | 第14-34页 |
| 1.1 实验材料 | 第14-15页 |
| 1.1.1 临床标本收集 | 第14页 |
| 1.1.2 实验设备与试剂 | 第14-15页 |
| 1.2 实验方法 | 第15-22页 |
| 1.2.1 术前评分及椎间盘退变程度评价 | 第15-17页 |
| 1.2.2 髓核细胞分离及原代培养 | 第17-18页 |
| 1.2.3 髓核细胞鉴定 | 第18-19页 |
| 1.2.4 不同浓度、时间TNF-α刺激髓核细胞 | 第19页 |
| 1.2.5 流式细胞术检测细胞凋亡情况 | 第19-20页 |
| 1.2.6 荧光定量PCR检测miR-494表达情况 | 第20-22页 |
| 1.2.7 统计学方法 | 第22页 |
| 1.3 结果 | 第22-29页 |
| 1.3.1 临床资料评价情况 | 第22-23页 |
| 1.3.2 髓核细胞培养情况 | 第23-24页 |
| 1.3.3 髓核细胞鉴定情况 | 第24-25页 |
| 1.3.4 髓核细胞凋亡率随TNF-α浓度、时间的增加而增加 | 第25-26页 |
| 1.3.5 miR-494表达量随TNF-α浓度、时间的增加而增加 | 第26-29页 |
| 1.4 讨论 | 第29-33页 |
| 1.4.1 正常椎间盘解剖与椎间盘退变因素 | 第29-32页 |
| 1.4.2 miRNA参与椎间盘退变 | 第32-33页 |
| 1.5 小结 | 第33-34页 |
| 二、miR-494调节TNF-α诱导的髓核细胞凋亡及潜在机制探讨 | 第34-51页 |
| 2.1 实验材料 | 第34-35页 |
| 2.2 实验方法 | 第35-43页 |
| 2.2.1 riboTRACERTM转染指示剂转染髓核细胞 | 第35-36页 |
| 2.2.2 antigomiR-494重组慢病毒包装过程 | 第36-39页 |
| 2.2.3 antigomiR-494重组慢病毒转染髓核细胞 | 第39-40页 |
| 2.2.4 转染后荧光定量PCR检测miR-494表达水平 | 第40-41页 |
| 2.2.5 流式细胞术检测细胞凋亡率 | 第41页 |
| 2.2.6 生物信息学方法预测靶基因及荧光素酶双报告基因验证靶基因 | 第41-42页 |
| 2.2.7 Western-blot检测JunD、细胞色素C蛋白表达水平 | 第42页 |
| 2.2.8 统计学分析 | 第42-43页 |
| 2.3 结果 | 第43-48页 |
| 2.3.1 riboTRACERTM转染指示剂转染髓核细胞的效率 | 第43页 |
| 2.3.2 antigomiR-494重组慢病毒的感染效率和有效性检测结果 | 第43-45页 |
| 2.3.3 miR-494敲除抑制TNF-α诱导的髓核细胞凋亡 | 第45-46页 |
| 2.3.4 miR-494可 能靶向JunD介 导线粒体凋亡通路调节髓核细胞凋亡 | 第46-48页 |
| 2.4 讨论 | 第48-49页 |
| 2.4.1 miR-494的功能分析 | 第48页 |
| 2.4.2 J unD基因生物学效应 | 第48-49页 |
| 2.4.3 细胞凋亡信号通路参与椎间盘退变 | 第49页 |
| 2.5 小结 | 第49-51页 |
| 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-59页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第59-60页 |
| 综述 MicroRNAs在椎间盘退变中作用的研究进展 | 第60-68页 |
| 综述参考文献 | 第63-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
