| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-32页 |
| 第一章 基因打靶技术的研究进展 | 第12-24页 |
| 1 基因打靶技术的发展 | 第12-15页 |
| ·基因打靶概述 | 第12-13页 |
| ·基因打靶的操作 | 第13-15页 |
| 2 基因打靶家蚕研究的现状 | 第15-17页 |
| 3 展望 | 第17-19页 |
| ·基于重组酶介导的位点特异性基因打靶 | 第17-18页 |
| ·基于锌指蛋白核酸酶技术的基因打靶 | 第18-19页 |
| 参考文献 | 第19-24页 |
| 第二章 抗菌肽的研究进展 | 第24-32页 |
| 1 抗菌肽的抗菌机制 | 第24-25页 |
| 2 抗菌肽的生物学活性 | 第25页 |
| ·抗菌肽的广谱抗菌活性 | 第25页 |
| ·抗菌肽具有抗肿瘤的作用 | 第25页 |
| ·抗菌肽具有促进伤口愈合的作用 | 第25页 |
| ·抗菌肽具有抗病毒的作用 | 第25页 |
| 3 抗菌肽应用前景 | 第25-27页 |
| ·抗菌肽作为饲料添加剂 | 第25-26页 |
| ·抗菌肽作为药物载体 | 第26页 |
| ·抗菌肽可作为新型抗生药物 | 第26页 |
| ·抗菌肽作为食品防腐剂 | 第26页 |
| ·抗菌肽可对畜禽疾病的治疗与预防作用 | 第26页 |
| ·抗菌肽的转基因研究 | 第26-27页 |
| 4 家蚕抗菌肽基因研究进展 | 第27-29页 |
| ·家蚕抗菌肽基因的研究 | 第27-28页 |
| ·已获得的家蚕抗菌肽基因 | 第28-29页 |
| ·家蚕抗菌肽基因研究的前景 | 第29页 |
| 参考文献 | 第29-32页 |
| 第二部分 研究报告 | 第32-82页 |
| 第三章 研究目的与内容 | 第32-34页 |
| 1 研究目的及意义 | 第32-33页 |
| 2 研究策略与内容 | 第33页 |
| ·轻链蛋白融合绿色荧光蛋白的基因打靶转基因家蚕研究 | 第33页 |
| ·轻链蛋白融合绿色荧光蛋白及抗菌肽的基因打靶转基因家蚕研究 | 第33页 |
| 3 技术路线 | 第33-34页 |
| 第四章 实验材料与方法 | 第34-49页 |
| 1 实验材料 | 第34-38页 |
| ·培养基 | 第34页 |
| ·常用溶液及缓冲液 | 第34-36页 |
| ·SDS-PAGE 试剂 | 第36-37页 |
| ·Western blot 试剂 | 第37-38页 |
| ·生物材料 | 第38页 |
| ·工具酶、试剂盒、杂交膜 | 第38页 |
| 2 常用仪器 | 第38-39页 |
| 3 实验方法 | 第39-47页 |
| ·碱裂解法少量制备质粒DNA | 第39-40页 |
| ·限制性内切酶反应 | 第40页 |
| ·连接反应 | 第40页 |
| ·CaCl_2 法制备E.coli 感受态细胞 | 第40-41页 |
| ·重组DNA 的转化 | 第41页 |
| ·家蚕细胞培养 | 第41-42页 |
| ·蚕蛾（蚕血）基因组的抽提 | 第42页 |
| ·PCR 扩增目的片段 | 第42-43页 |
| ·家蚕后部丝腺蛋白质的提取 | 第43页 |
| ·RT-PCR | 第43-44页 |
| ·SDS-PAGE 电泳和Western blot | 第44-46页 |
| ·缫丝 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-49页 |
| 第五章 Fib-L 融合GFP 的基因打靶 | 第49-59页 |
| 1 引言 | 第49-50页 |
| 2 材料与方法 | 第50-52页 |
| ·实验材料 | 第50-51页 |
| ·PCR 引物 | 第51页 |
| ·打靶载体pSK-FibL-L-GFP–FibL-R 的构建 | 第51-52页 |
| ·转基因载体转染BmN 细胞 | 第52页 |
| ·用精子介导法将转基因载体导入家蚕卵 | 第52页 |
| ·转基因家蚕的筛选 | 第52页 |
| ·转基因蚕的PCR 和RT-PCR 鉴定 | 第52页 |
| ·转基因家蚕丝腺表达蛋白的Western blot 检测 | 第52页 |
| ·缫丝 | 第52页 |
| 3 结果与分析 | 第52-55页 |
| ·转基因载体的鉴定 | 第52-53页 |
| ·转基因载体的转家蚕BmN 细胞 | 第53页 |
| ·转基因家蚕的筛选 | 第53-54页 |
| ·转基因家蚕的分子鉴定 | 第54-55页 |
| ·转基因蚕茧经缫丝后的荧光鉴定 | 第55页 |
| 4 讨论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-59页 |
| 第六章 Fib-L 融合GFP 及抗菌肽的转基因家蚕 | 第59-69页 |
| 1 引言 | 第59-60页 |
| 2 材料与方法 | 第60-62页 |
| ·实验材料 | 第60页 |
| ·引物及PCR 扩增 | 第60-61页 |
| ·打靶载体的构建 | 第61-62页 |
| ·用精子介导法将打靶载体导入家蚕卵 | 第62页 |
| 3 结果与分析 | 第62-66页 |
| ·打靶载体的构建 | 第62-63页 |
| ·基因打靶载体的转基因细胞研究 | 第63-64页 |
| ·融合GFP 与家蚕抗菌肽基因的转基因家蚕的获得 | 第64页 |
| ·转基因家蚕的荧光及分子生物学鉴定 | 第64-66页 |
| 4 讨论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-69页 |
| 第七章 家蚕SOCS-2 基因的克隆与序列分析 | 第69-81页 |
| 1 引言 | 第69-71页 |
| 2 材料与方法 | 第71-73页 |
| ·材料 | 第71页 |
| ·BmSOCS-2 基因的克隆及组织表达 | 第71页 |
| ·BmSOCS 基因的生物信息学分析 | 第71-73页 |
| 3 结果与分析 | 第73-77页 |
| ·家蚕SOCS 基因的电子克隆及RT-PCR | 第73页 |
| ·BmSOCS-2 基因及其编码氨基酸的结构域分析 | 第73-74页 |
| ·BmSOCS-2 基因的同源性比较 | 第74-75页 |
| ·BmSOCS-2 基因的表达谱分析 | 第75-76页 |
| ·分子进化树分析 | 第76-77页 |
| 4 讨论 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-81页 |
| 结论 | 第81-82页 |
| 1 已取得的成果 | 第81页 |
| 2 有待进行的研究 | 第81-82页 |
| 附录一 缩略词中英文对照表 | 第82-84页 |
| 附录二 实验中使用的部分载体结构图 | 第84-86页 |
| 附录三 攻硕期间科研情况 | 第86-87页 |
| 1 研究课题 | 第86页 |
| 2 发表论文 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
