| 第一部分 受体酪氨酸磷酸酶PTPRU在胶质瘤中的功能研究 | 第5-8页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 第二部分 丝苏氨酸激酶CDKL5在胶质瘤中的功能研究 | 第8-21页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-21页 |
| 第一部分 受体酪氨酸磷酸酶PTPRU在胶质瘤中的功能研究 | 第21-62页 |
| 第1章 前言 | 第21-30页 |
| 1.1 恶性胶质瘤的介绍 | 第21-23页 |
| 1.1.1 胶质瘤的病因与治疗 | 第21-22页 |
| 1.1.2 胶质瘤的增殖与侵袭 | 第22-23页 |
| 1.2 受体酪氨酸磷酸酶的研究现状 | 第23-28页 |
| 1.2.1 酪氨酸磷酸酶和PTPRU | 第23-24页 |
| 1.2.2 R2B型受体酪氨酸磷酸酶与癌症 | 第24-25页 |
| 1.2.3 胶质瘤中PTPRU的表达 | 第25-28页 |
| 1.3 β-catenin信号通路的介绍 | 第28-29页 |
| 1.4 局部粘附蛋白的介绍 | 第29-30页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第30-41页 |
| 2.1 细胞培养 | 第30页 |
| 2.2 胶质瘤病人样本的采集 | 第30页 |
| 2.3 质粒构建和慢病毒包装 | 第30-33页 |
| 2.3.1 构建PTPRU的干扰质粒 | 第30-31页 |
| 2.3.2 构建LEF1-CTNNB1融合质粒 | 第31-32页 |
| 2.3.3 筛选有效shRNA | 第32页 |
| 2.3.4 慢病毒感染细胞 | 第32-33页 |
| 2.4 蛋白免疫印迹 | 第33-35页 |
| 2.4.1 提取细胞蛋白 | 第33页 |
| 2.4.2 提取组织蛋白 | 第33页 |
| 2.4.3 配置SDS-PAGE凝胶 | 第33-34页 |
| 2.4.4 电泳与转膜 | 第34页 |
| 2.4.5 孵育抗体 | 第34页 |
| 2.4.6 显影 | 第34-35页 |
| 2.4.7 免疫印迹实验所用抗体 | 第35页 |
| 2.5 定量PCR | 第35-36页 |
| 2.6 免疫细胞荧光 | 第36页 |
| 2.7 MTT分析 | 第36页 |
| 2.8 克隆形成分析 | 第36页 |
| 2.9 流式细胞术检测细胞周期和凋亡 | 第36-37页 |
| 2.10 Transwell侵袭实验和Transwell迁移实验 | 第37页 |
| 2.11 划痕-愈合实验 | 第37-38页 |
| 2.12 细胞粘附实验 | 第38页 |
| 2.13 血管生成拟态实验 | 第38页 |
| 2.14 裸鼠颅内成瘤实验 | 第38-39页 |
| 2.15 H&E染色 | 第39页 |
| 2.16 免疫组织荧光 | 第39页 |
| 2.17 免疫沉淀 | 第39页 |
| 2.18 荧光素酶报告实验 | 第39-40页 |
| 2.19 数据统计 | 第40-41页 |
| 第3章 实验结果 | 第41-58页 |
| 3.1 PTPRU在胶质母细胞瘤中的表达情况 | 第41-43页 |
| 3.1.1 PTPRU在人乳腺癌、肺癌、胶质母细胞瘤细胞系中的表达情况 | 第41页 |
| 3.1.2 PTPRU在大鼠胶质母细胞瘤细胞系和原代大鼠胶质细胞中的表达情况 | 第41-42页 |
| 3.1.3 PTPRU在胶质母细胞瘤细胞系的细胞浆/膜和细胞核中的分布 | 第42页 |
| 3.1.4 全长型PTPRU和PTPRU-130kDa亚型的表达水平与胶质瘤恶性程度的关系 | 第42-43页 |
| 3.2 针对PTPRU mRNA的shRNA的敲减有效性验证 | 第43-45页 |
| 3.3 敲减PTPRU抑制胶质母细胞瘤细胞的增殖和存活能力 | 第45-46页 |
| 3.4 敲减PTPRU影响胶质母细胞瘤细胞的细胞周期分布、凋亡及相关蛋白的表达 | 第46-48页 |
| 3.4.1 敲减PTPRU改变胶质母细胞瘤细胞的细胞周期分布,并促进凋亡 | 第46-47页 |
| 3.4.2 敲减PTPRU影响增殖、凋亡相关蛋白的表达水平 | 第47-48页 |
| 3.5 敲减PTPRU抑制胶质母细胞瘤细胞的运动能力和血管生成拟态能力 | 第48-52页 |
| 3.5.1 敲减PTPRU改变胶质母细胞瘤细胞的形态 | 第48-49页 |
| 3.5.2 敲减PTPRU抑制胶质母细胞瘤细胞的侵袭、迁移和粘附能力 | 第49-50页 |
| 3.5.3 敲减PTPRU抑制胶质母细胞瘤细胞的血管生成拟态能力 | 第50-51页 |
| 3.5.4 敲减PTPRU抑制细胞运动和血管生成拟态相关蛋白的水平 | 第51-52页 |
| 3.6 敲减PTPRU抑制胶质母细胞瘤细胞在裸鼠颅内的生长 | 第52-53页 |
| 3.7 敲减PTPRU抑制胶质母细胞瘤细胞中的β-catenin转录激活信号通路 | 第53-55页 |
| 3.7.1 敲减PTPRU引起β-catenin的去酪氨酸磷酸化和转录激活活性下调 | 第53-54页 |
| 3.7.2 β-catenin介导PTPRU对胶质母细胞瘤迁移能力的调控 | 第54-55页 |
| 3.7.3 胶质母细胞瘤细胞中β-catenin的转录激活活性显著低于结肠癌细胞 | 第55页 |
| 3.8 敲减PTPRU促进FAK蛋白通过泛素化-蛋白酶体途径降解 | 第55-58页 |
| 3.8.1 敲减PTPRU促进局部粘附蛋白的降解 | 第55-56页 |
| 3.8.2 敲减PTPRU促进FAK蛋白通过泛素-蛋白酶体途径降解 | 第56-57页 |
| 3.8.3 胶质瘤组织中PTPRU-130kDa蛋白亚型与局部粘附蛋白的表达正相关 | 第57-58页 |
| 第4章 讨论 | 第58-62页 |
| 4.1 PTPRU在恶性胶质瘤中的表达 | 第58-59页 |
| 4.2 PTPRU稳定局部粘附蛋白 | 第59页 |
| 4.3 PTPRU维持β-catenin的转录激活活性 | 第59-62页 |
| 第二部分 丝苏氨酸激酶CDKL5在胶质瘤中的功能研究 | 第62-94页 |
| 第1章 前言 | 第62-76页 |
| 1.1 CDKL5蛋白 | 第62-68页 |
| 1.1.1 CDKL5蛋白的结构与功能 | 第62-63页 |
| 1.1.2 CDKL5蛋白的调控机制与相应功能 | 第63-64页 |
| 1.1.3 CDKL5与癌症 | 第64-68页 |
| 1.2 胶质瘤干细胞与分化 | 第68-71页 |
| 1.2.1 胶质瘤干细胞 | 第68-69页 |
| 1.2.2 表观遗传调控与胶质瘤分化 | 第69-71页 |
| 1.2.3 其他胶质瘤分化机制 | 第71页 |
| 1.3 TRAIL耐受性的分子机制 | 第71-76页 |
| 1.3.1 TRAIL与TRAIL受体 | 第71-72页 |
| 1.3.2 TRAIL受体信号通路 | 第72-73页 |
| 1.3.3 TRAIL耐受性机制 | 第73-74页 |
| 1.3.4 上调DR5表达降低胶质瘤TRAIL耐受性 | 第74-76页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第76-78页 |
| 2.1 细胞培养 | 第76页 |
| 2.2 质粒构建 | 第76-77页 |
| 2.3 免疫印迹实验所用抗体 | 第77页 |
| 2.4 裸鼠皮下成瘤实验 | 第77页 |
| 2.5 肿瘤球形成分析 | 第77页 |
| 2.6 流式细胞术检测细胞膜DR5的表达 | 第77-78页 |
| 第3章 实验结果 | 第78-91页 |
| 3.1 CDKL5在胶质瘤中的表达情况 | 第78-79页 |
| 3.1.1 CDKL5在癌症细胞系中的表达情况 | 第78-79页 |
| 3.1.2 CDKL5在胶质瘤组织中的表达情况 | 第79页 |
| 3.2 敲减CDKL5抑制胶质母细胞瘤细胞的生长 | 第79-82页 |
| 3.2.1 敲减CDKL5抑制胶质母细胞瘤细胞的体外生长 | 第79-81页 |
| 3.2.2 敲减CDKL5抑制胶质母细胞瘤细胞的体内生长 | 第81-82页 |
| 3.3 敲减CDKL5抑制胶质母细胞瘤细胞的迁移和侵袭 | 第82页 |
| 3.4 敲减CDKL5促进胶质母细胞瘤细胞的分化 | 第82-84页 |
| 3.4.1 敲减CDKL5引起胶质母细胞瘤细胞形态的改变 | 第82-83页 |
| 3.4.2 敲减CDKL5引起胶质瘤分化相关标记物表达的改变 | 第83页 |
| 3.4.3 敲减CDKL5引起表观遗传标记物表达的改变 | 第83-84页 |
| 3.5 敲减CDKL5抑制U87细胞的干细胞属性 | 第84-85页 |
| 3.6 抑制MAPK信号通路对胶质母细胞瘤细胞向星形胶质细胞分化的影响 | 第85-86页 |
| 3.7 CDKL5107不影响胶质母细胞瘤细胞增殖 | 第86页 |
| 3.8 敲减CDKL5促进TRAIL诱导胶质母细胞瘤细胞产生凋亡 | 第86-89页 |
| 3.8.1 敲减CDKL5降低胶质母细胞瘤细胞对TRAIL的耐受性 | 第86-87页 |
| 3.8.2 敲减CDKL5促进TRAIL诱导胶质母细胞瘤细胞产生胱天蛋白酶依赖型凋亡 | 第87-88页 |
| 3.8.3 敲减CDKL5对TRAIL处理下凋亡相关蛋白表达的影响 | 第88-89页 |
| 3.9 敲减CDKL5促进胶质母细胞瘤细胞中DR5的表达 | 第89-91页 |
| 第4章 讨论 | 第91-94页 |
| 4.1 CDKL5在胶质母细胞瘤中的表达 | 第91-92页 |
| 4.2 CDKL5调控表观遗传修饰 | 第92-93页 |
| 4.3 CDKL5调控TRAIL耐受性 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-118页 |
| 致谢 | 第118-119页 |
| 附录Ⅰ 在校期间发表文章 | 第119页 |
