| 缩略词 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-17页 |
| 1 Spreds 家族结构特征及分布 | 第12-14页 |
| ·Spreds 家族结构特征 | 第12-13页 |
| ·Spreds 家族分布 | 第13-14页 |
| 2 Spreds 与肿瘤 | 第14-15页 |
| ·Spreds 与肝癌 | 第14页 |
| ·Spreds 与其它肿瘤 | 第14-15页 |
| ·Spreds 调控肿瘤的机制 | 第15页 |
| 3 展望 | 第15-16页 |
| 4 本论文研究的目的和意义 | 第16-17页 |
| 第2章 Spred2 对肝癌细胞增殖、迁移及凋亡的影响 | 第17-29页 |
| 1 材料 | 第17-19页 |
| ·细胞株 | 第17页 |
| ·重组腺病毒 | 第17页 |
| ·PCR 引物 | 第17页 |
| ·主要试剂 | 第17-18页 |
| ·主要耗材与仪器 | 第18页 |
| ·主要试剂的配制 | 第18-19页 |
| 2 方法 | 第19-23页 |
| ·细胞培养 | 第19页 |
| ·Western blot 在蛋白水平上检测内源性Spred2 在肝癌细胞与正常肝细胞中的表达 | 第19-20页 |
| ·RT-PCR 在基因组水平检测内源性Spred2 在肝癌细胞与正常肝细胞中的表达 | 第20-22页 |
| ·不同感染滴度的重组腺病毒Ad5 | 第22页 |
| ·CCK-8 试剂盒法检测细胞增殖 | 第22页 |
| ·Transwell 迁移实验检测Spred2 对SMMC-7721 细胞迁移特性的影响 | 第22页 |
| ·Annexin V-FITC /PI 双标检测SMMC-7721 细胞凋亡 | 第22-23页 |
| ·统计分析方法 | 第23页 |
| 3 结果 | 第23-27页 |
| ·Spred2 在肝癌细胞与正常肝细胞中的表达检测 | 第23-24页 |
| ·重组腺病毒Ad5/f11p-Spred2 感染SMMC-7721 细胞Spred2 表达的检测 | 第24-25页 |
| ·Spred2 过表达抑制SMMC-7721 细胞增殖 | 第25页 |
| ·Spred2 过表达抑制SMMC-7721 细胞迁移 | 第25-26页 |
| ·Spred2 过表达诱导SMMC-7721 细胞凋亡 | 第26-27页 |
| 4 讨论 | 第27-29页 |
| 第3章 Spred2 调节肝癌细胞生物学特性的分子机制 | 第29-39页 |
| 1 材料 | 第29-30页 |
| ·细胞系 | 第29页 |
| ·重组腺病毒 | 第29页 |
| ·主要试剂 | 第29页 |
| ·主要耗材及仪器 | 第29页 |
| ·主要液体配置 | 第29-30页 |
| 2 方法 | 第30-33页 |
| ·蛋白提取及定量 | 第30-31页 |
| ·Western blot | 第31-32页 |
| ·Western blot 在蛋白质水平上检测与Spred2 功能相关的信号通路分子表达 | 第32-33页 |
| ·用PE-Anti active Capase3 Kit 法检测Caspase3 活性 | 第33页 |
| 3 结果 | 第33-37页 |
| ·过表达Spred2 抑制SMMC-7721 细胞ERK 磷酸化水平 | 第33-34页 |
| ·过表达Spred2 抑制HGF 诱导的SMMC-7721 细胞ERK 磷酸化水平 | 第34-36页 |
| ·过表达Spred2 下调SMMC-7721 细胞Mcl-1 的表达水平 | 第36-37页 |
| ·Spred2 以Caspase3 部分依赖的方式诱导SMMC-7721 细胞凋亡 | 第37页 |
| 4 讨论 | 第37-39页 |
| 第4章 Spred2 对人肝癌细胞成瘤的影响 | 第39-43页 |
| 1 材料 | 第39页 |
| ·细胞系 | 第39页 |
| ·质粒载体 | 第39页 |
| ·动物 | 第39页 |
| ·主要试剂 | 第39页 |
| 2 方法 | 第39-40页 |
| ·阳离子脂质体瞬时转染Spred2 基因及其干涉基因到SMMC-7721 细胞 | 第39-40页 |
| ·Spred2 过表达及干涉的肝癌细胞裸鼠皮下接种成瘤 | 第40页 |
| 3 结果 | 第40-42页 |
| ·Spred2 基因及其干涉基因转染肝癌细胞后检测Spred2 的表达 | 第40-41页 |
| ·Spred2 过表达及干涉的肝癌细胞裸鼠体内成瘤检测 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-43页 |
| 结论与建议 | 第43-44页 |
| 1 结论 | 第43页 |
| 2 进一步的工作建议 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 附录 攻读学位期间所发表的学术论文目录 | 第51页 |
