| 致谢 | 第5-9页 |
| 英文缩写词表 | 第9-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| 文献综述 | 第12-27页 |
| 1 鸡杆菌概述 | 第12-17页 |
| 1.1 鸡杆菌分类地位的确立 | 第12-13页 |
| 1.2 鸡杆菌的致病性 | 第13页 |
| 1.3 鸭源鸡杆菌主要毒力因子 | 第13-17页 |
| 2 外膜蛋白 | 第17-20页 |
| 2.1 外膜蛋白概述 | 第17-18页 |
| 2.2 外膜蛋白W（Outer membrane protein W, OmpW） | 第18-20页 |
| 3 基因功能研究方法 | 第20-21页 |
| 3.1 基因生物信息学分析 | 第20页 |
| 3.2 基因的表达谱分析 | 第20-21页 |
| 3.3 蛋白相互作用研究 | 第21页 |
| 3.4 基因功能的实验学验证 | 第21页 |
| 4 基因敲除(Gene knock)技术 | 第21-25页 |
| 4.1 随机插入突变法 | 第21-22页 |
| 4.2 基因重组技术 | 第22-24页 |
| 4.3 RNA干扰 | 第24-25页 |
| 5 基因敲除技术在鸭源鸡杆菌中的应用 | 第25页 |
| 6 小结 | 第25-27页 |
| 试验研究 | 第27-57页 |
| 试验一 鸭源鸡杆菌外膜蛋白W基因克隆及生物信息学分析 | 第27-38页 |
| 引言 | 第27页 |
| 1 材料与方法 | 第27-30页 |
| 1.1 菌株 | 第27-28页 |
| 1.2 主要试剂 | 第28页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第28-29页 |
| 1.4 引物设计与合成 | 第29页 |
| 1.5 细菌的培养 | 第29页 |
| 1.6 OmpW基因的扩增及测序 | 第29页 |
| 1.7 OmpW核苷酸及编码氨基酸序列分析 | 第29页 |
| 1.8 OmpW理化性质分析 | 第29页 |
| 1.9 OmpW信号肽及结构分析 | 第29-30页 |
| 1.10 OmpW B细胞抗原表位预测 | 第30页 |
| 2 结果与分析 | 第30-35页 |
| 2.1 OmpW基因的PCR扩增 | 第30页 |
| 2.2 OmpW核苷酸序列分析 | 第30-31页 |
| 2.3 OmpW氨基酸同源性分析 | 第31-33页 |
| 2.4 OmpW的理化性质 | 第33-34页 |
| 2.5 OmpW信号肽及结构分析 | 第34-35页 |
| 2.6 OmpW线性B细胞抗原表位预测 | 第35页 |
| 3 讨论 | 第35-38页 |
| 试验二 鸭源鸡杆菌外膜蛋白W基因的表达及抗原性鉴定 | 第38-45页 |
| 前言 | 第38页 |
| 1 材料和方法 | 第38-40页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第38页 |
| 1.2 酶及主要试剂 | 第38-39页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第39页 |
| 1.4 引物设计及合成 | 第39页 |
| 1.5 细菌基因组DNA的制备 | 第39页 |
| 1.6 OmpW基因的扩增 | 第39页 |
| 1.7 重组表达质粒的构建及鉴定 | 第39页 |
| 1.8 重组菌的诱导表达 | 第39-40页 |
| 1.9 OmpW蛋白的纯化和Western blot鉴定 | 第40页 |
| 1.10 多克隆抗体的制备及鉴定 | 第40页 |
| 2 结果与分析 | 第40-44页 |
| 2.1 OmpW基因的扩增 | 第40-41页 |
| 2.2 重组表达质粒的鉴定 | 第41页 |
| 2.3 表达产物的SDS-PAGE分析 | 第41-42页 |
| 2.4 原核表达OmpW Western blotting鉴定 | 第42-43页 |
| 2.5 OmpW免疫原性分析 | 第43-44页 |
| 3 讨论 | 第44-45页 |
| 试验三 鸭源鸡杆菌OmpW基因敲除株的构建 | 第45-57页 |
| 引言 | 第45页 |
| 1 菌株与材料 | 第45-47页 |
| 1.1 菌株与质粒 | 第45-46页 |
| 1.2 主要试剂 | 第46页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第46页 |
| 1.4 主要培养基的配制 | 第46-47页 |
| 2 方法 | 第47-51页 |
| 2.1 国内菌株自然感受基因的检测 | 第47-48页 |
| 2.2 鸭源鸡杆菌ΔOmpW突变株的构建 | 第48-51页 |
| 3 结果与分析 | 第51-55页 |
| 3.1 鸭源鸡杆菌PDS-RZ-1-SLG基因组含有自然感受基因 | 第51-52页 |
| 3.2 主要自然感受相关基因测定 | 第52-53页 |
| 3.3 OmpW基因上下游同源臂及CMP抗性盒子的扩增 | 第53页 |
| 3.4 pUC18-S-C-X质粒的酶切鉴定 | 第53-54页 |
| 3.5 鸭源鸡杆菌突变株的鉴定 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-57页 |
| 全文总结 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-67页 |
| 附:作者读研期间发表文章 | 第67-68页 |
| ABSTRACT | 第68-69页 |
