| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 符号说明 | 第11-19页 |
| 第一章 文献综述 | 第19-25页 |
| 1.1 ERK分子特点 | 第19-21页 |
| 1.1.1 ERK1和ERK2分子 | 第19页 |
| 1.1.2 ERK3和ERK4分子 | 第19-20页 |
| 1.1.3 ERK5分子 | 第20页 |
| 1.1.4 ERK6分子 | 第20页 |
| 1.1.5 ERK7分子 | 第20-21页 |
| 1.1.6 ERK8分子 | 第21页 |
| 1.2 ERK分子基本作用方式 | 第21-22页 |
| 1.3 ERK分子在弓形虫上的研究进展 | 第22-25页 |
| 第二章 真核表达质粒pVAX/TgERK7及TgERK7重组蛋白的免疫原性评价 | 第25-71页 |
| 第一节 TgERK7多克隆抗体制备与效果检测 | 第25-32页 |
| 1.1 引言 | 第25页 |
| 1.2 实验材料 | 第25-26页 |
| 1.2.1 T. gondii虫株、细胞和实验动物 | 第25-26页 |
| 1.2.2 主要仪器 | 第26页 |
| 1.2.3 主要试剂 | 第26页 |
| 1.3 实验方法 | 第26-28页 |
| 1.3.1 TgERK7抗原表位预测 | 第26-27页 |
| 1.3.2 多克隆抗体的制备与检测 | 第27页 |
| 1.3.3 间接免疫荧光（IFA）评价多抗效果 | 第27-28页 |
| 1.4 结果与讨论 | 第28-31页 |
| 1.4.1 TgERK7抗原表位预测 | 第28页 |
| 1.4.2 多克隆抗体效果检测 | 第28-31页 |
| 1.5 小结 | 第31-32页 |
| 第二节 真核表达质粒pVAX/TgERK7免疫效果评价 | 第32-51页 |
| 2.1 引言 | 第32页 |
| 2.2 实验材料 | 第32-34页 |
| 2.2.1 实验动物、质粒和细胞 | 第32-33页 |
| 2.2.2 主要仪器 | 第33页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第33-34页 |
| 2.3 实验方法 | 第34-41页 |
| 2.3.1 弓形虫GT1虫体总RNA提取 | 第34页 |
| 2.3.2 真核表达质粒pVAX/TgERK7的构建与鉴定 | 第34-37页 |
| 2.3.3 重组质粒pVAX/TgERK7的体外表达 | 第37-38页 |
| 2.3.4 质粒的大量提取与测定 | 第38-39页 |
| 2.3.5 重组质粒pVAX/TgERK7免疫效果评价 | 第39-40页 |
| 2.3.6 免疫指标的检测 | 第40-41页 |
| 2.3.7 统计学分析 | 第41页 |
| 2.4 结果与分析 | 第41-48页 |
| 2.4.1 pVAX/TgERK7重组质粒的构建与鉴定 | 第41-43页 |
| 2.4.2 免疫前后BALB/c鼠血清抗体指标 | 第43-44页 |
| 2.4.3 免疫鼠血清中细胞因子的检测 | 第44-46页 |
| 2.4.4 脾淋巴细胞增殖实验 | 第46页 |
| 2.4.5 流式细胞术分析脾淋巴细胞亚群 | 第46-47页 |
| 2.4.6 攻虫感染实验 | 第47-48页 |
| 2.5 讨论 | 第48-50页 |
| 2.6 小结 | 第50-51页 |
| 第三节 原核表达TgERK7蛋白及免疫原性分析 | 第51-71页 |
| 3.1 引言 | 第51页 |
| 3.2 实验材料 | 第51-52页 |
| 3.2.1 实验动物、质粒和细胞 | 第51-52页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第52页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第52页 |
| 3.3 实验方法 | 第52-57页 |
| 3.3.1 原核表达载体pET/TgERK7的构建与鉴定 | 第52-53页 |
| 3.3.2 转化BL21感受态细胞 | 第53页 |
| 3.3.3 原核表达弓形虫TgERK7蛋白 | 第53-54页 |
| 3.3.4 包涵体蛋白的纯化、透析与测定 | 第54-55页 |
| 3.3.5 原核表达蛋白TgERK7免疫效果评价 | 第55-56页 |
| 3.3.6 免疫指标的检测 | 第56页 |
| 3.3.7 多抗-GT1速殖子胞外互作（验证实验） | 第56页 |
| 3.3.8 统计分析 | 第56-57页 |
| 3.4 结果与分析 | 第57-67页 |
| 3.4.1 重组载体pET/TgERK7的构建与鉴定 | 第57-58页 |
| 3.4.2 原核表达TgERK7蛋白 | 第58-61页 |
| 3.4.3 免疫前后BALB/c鼠血清抗体水平 | 第61-63页 |
| 3.4.4 免疫鼠血清细胞因子的检测 | 第63-64页 |
| 3.4.5 脾淋巴细胞增殖实验 | 第64-65页 |
| 3.4.6 流式细胞术分析脾淋巴细胞亚群 | 第65-66页 |
| 3.4.7 攻虫感染 | 第66-67页 |
| 3.4.8 多抗-GT1速殖子互作实验 | 第67页 |
| 3.5 讨论 | 第67-70页 |
| 3.6 小结 | 第70-71页 |
| 第三章 弓形虫TgERK7基因功能研究 | 第71-117页 |
| 第一节 弓形虫ΔTgERK7缺失株的构建与毒力分析 | 第71-90页 |
| 1.1 引言 | 第71页 |
| 1.2 实验材料 | 第71-72页 |
| 1.2.1 实验动物、质粒和细胞 | 第71页 |
| 1.2.2 主要仪器 | 第71-72页 |
| 1.2.3 主要试剂 | 第72页 |
| 1.3 实验方法 | 第72-79页 |
| 1.3.1 缺失载体ΔERK7-pBluescript II SK (+)的构建与鉴定 | 第72-76页 |
| 1.3.2 大量提取ΔERK7-pBluescript II SK (+)质粒 | 第76页 |
| 1.3.3 弓形虫GT1速殖子的纯化和电转 | 第76-77页 |
| 1.3.4 ΔTgERK7缺失株的筛选 | 第77页 |
| 1.3.5 ΔTgERK7缺失株的鉴定 | 第77-78页 |
| 1.3.6 缺失株ΔTgERK7毒力检测 | 第78-79页 |
| 1.3.7 统计分析 | 第79页 |
| 1.4 结果与分析 | 第79-87页 |
| 1.4.1 缺失载体ΔERK7-pBluescript II SK (+)的构建与鉴定 | 第79-82页 |
| 1.4.2 缺失株ΔTgERK7的鉴定 | 第82-83页 |
| 1.4.3 缺失株ΔTgERK7的毒力检测 | 第83-87页 |
| 1.5 讨论 | 第87-89页 |
| 1.6 小结 | 第89-90页 |
| 第二节 补充株pUC/TgERK7的筛选与鉴定 | 第90-103页 |
| 2.1 引言 | 第90页 |
| 2.2 实验材料 | 第90页 |
| 2.2.1 质粒、细胞和虫株 | 第90页 |
| 2.2.2 主要仪器 | 第90页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第90页 |
| 2.3 实验方法 | 第90-95页 |
| 2.3.1 补充载体pUC/TgERK7的构建及鉴定 | 第90-93页 |
| 2.3.2 缺失株ΔTgERK7速殖子的纯化和电转 | 第93页 |
| 2.3.3 pUC/TgERK7补充株的筛选 | 第93页 |
| 2.3.4 pUC/TgERK7补充株的鉴定 | 第93-94页 |
| 2.3.5 统计学分析 | 第94-95页 |
| 2.4 结果与分析 | 第95-102页 |
| 2.4.1 重组体pUC/frag A和pUC/frag B的构建与酶切鉴定 | 第95-97页 |
| 2.4.2 TgERK7表达序列的克隆与酶切鉴定 | 第97-98页 |
| 2.4.3 CAT抗性基因的克隆与酶切鉴定 | 第98-99页 |
| 2.4.4 重组体pUC/TgERK7的PCR鉴定 | 第99-100页 |
| 2.4.5 pUC/TgERK7补充株的鉴定 | 第100-102页 |
| 2.5 小结 | 第102-103页 |
| 第三节 弓形虫TgERK7基因的生物学功能研究 | 第103-117页 |
| 3.1 引言 | 第103页 |
| 3.2 实验材料 | 第103-104页 |
| 3.2.1 T. gondii虫株、细胞和抗体 | 第103-104页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第104页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第104页 |
| 3.3 实验方法 | 第104-108页 |
| 3.3.1 T. gondii虫体培养和纯化 | 第104页 |
| 3.3.2 噬斑实验 | 第104-105页 |
| 3.3.3 逸出实验 | 第105页 |
| 3.3.4 胞内增殖实验 | 第105-106页 |
| 3.3.5 入侵和吸附实验 | 第106-108页 |
| 3.3.6 间接免疫荧光（IFA）定位TgERK7蛋白 | 第108页 |
| 3.3.7 统计学分析 | 第108页 |
| 3.4 结果与分析 | 第108-115页 |
| 3.4.1 细胞噬斑实验 | 第108-110页 |
| 3.4.2 逸出实验 | 第110页 |
| 3.4.3 胞内增殖实验 | 第110-112页 |
| 3.4.4 入侵和吸附实验 | 第112-113页 |
| 3.4.5 TgERK7蛋白的亚细胞定位 | 第113-115页 |
| 3.5 讨论 | 第115-116页 |
| 3.6 小结 | 第116-117页 |
| 第四章 弓形虫TgERK7蛋白结构预测 | 第117-135页 |
| 1.1 引言 | 第117-118页 |
| 1.2 结果与分析 | 第118-131页 |
| 1.2.1 TgERK7蛋白主要保守区分析 | 第118-119页 |
| 1.2.2 二级结构预测 | 第119-122页 |
| 1.2.3 三级结构预测 | 第122-130页 |
| 1.2.4 TgERK7蛋白分子组装 | 第130-131页 |
| 1.3 讨论 | 第131-133页 |
| 1.4 小结 | 第133-135页 |
| 第五章 全文结论 | 第135-136页 |
| 参考文献 | 第136-157页 |
| 致谢 | 第157-158页 |
| 附录 | 第158-164页 |
| 附录A 引物序列 | 第158-159页 |
| 附录B 真核表达质粒p VAX/Tg ERK7 构建路线图 | 第159-160页 |
| 附录C 原核表达质粒p ET/Tg ERK7 构建路线图 | 第160-161页 |
| 附录D 缺失载体ΔERK7-p Bluescript II SK (+)构建路线图 | 第161-162页 |
| 附录E 重组质粒p UC/frag A和p UC/frag B构建路线图 | 第162-163页 |
| 附录F 补充载体p UC/Tg ERK7 构建路线图 | 第163-164页 |
| 攻读学位期间撰写论文题录 | 第164-166页 |
| 个人简介 | 第166页 |
