| 致谢 | 第5-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩写汇总 | 第17-19页 |
| 1 引言 | 第19-37页 |
| 1.1 离子通道 | 第19-23页 |
| 1.1.1 离子通道的离子选择性 | 第20-21页 |
| 1.1.2 离子通道的门控 | 第21-22页 |
| 1.1.3 离子通道的阻断 | 第22-23页 |
| 1.2 MthK钾离子通道 | 第23-31页 |
| 1.2.1 带RCK结构域的配体门控的钾离子通道 | 第23-26页 |
| 1.2.2 MthK钾离子通道门控环的关闭状态和半开放状态的结构 | 第26-27页 |
| 1.2.3 MthK钾离子通道的门控机制研究初步 | 第27-28页 |
| 1.2.4 MthK通道的孔道结构域结构分析定性揭示反常摩尔混合效应 | 第28-31页 |
| 1.3 钾离子通道阻断机制 | 第31-33页 |
| 1.3.1 MthK钾离子通道的离子选择筛 | 第32-33页 |
| 1.3.2 钡离子对钾离子通道的阻断效应 | 第33页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第33-37页 |
| 2 材料与方法 | 第37-77页 |
| 2.1 实验材料 | 第37-47页 |
| 2.1.1 主要研究对象 | 第37页 |
| 2.1.2 质粒 | 第37页 |
| 2.1.3 菌株及细胞系 | 第37页 |
| 2.1.4 工具酶、试剂与耗材 | 第37-39页 |
| 2.1.5 实验用仪器和工具 | 第39-41页 |
| 2.1.6 晶体筛选试剂盒与优化试剂 | 第41-42页 |
| 2.1.7 主要溶液的配制 | 第42-47页 |
| 2.2 实验方法 | 第47-77页 |
| 2.2.1 感受态细胞的制备 | 第47-49页 |
| 2.2.2 基因克隆 | 第49-56页 |
| 2.2.3 目的蛋白的表达与初步纯化检测 | 第56-58页 |
| 2.2.4 目的蛋白的表达 | 第58-59页 |
| 2.2.5 目的蛋白的纯化 | 第59-64页 |
| 2.2.6 蛋白质结晶 | 第64-71页 |
| 2.2.7 蛋白质晶体的X射线衍射数据收集和结构解析 | 第71-75页 |
| 2.2.8 Western Blot实验 | 第75页 |
| 2.2.9 电生理实验 | 第75-77页 |
| 3 MthK钾离子通道的钡阻断机制以及门控机制的结构生物学研究 | 第77-97页 |
| 3.1 MthK钾离子通道的分子克隆和尝试表达 | 第77-78页 |
| 3.1.1 MthK钾离子通道的分子克隆 | 第77页 |
| 3.1.2 MthK钾离子通道的小量表达测试 | 第77-78页 |
| 3.2 MthK钾离子通道的纯化、结晶以及晶体的筛选优化 | 第78-87页 |
| 3.2.1 MthK钾离子通道蛋白的大量表达与纯化 | 第78-82页 |
| 3.2.2 MthK钾离子通道蛋白的晶体生长 | 第82页 |
| 3.2.3 无钙离子存在下的MthK钾离子通道关闭状态的晶体生长,数据收集以及初步晶体学分析 | 第82-83页 |
| 3.2.4 高分辨率MthK钾离子通道的孔道结构域开放状态的结构显示清晰的水合钾离子 | 第83-84页 |
| 3.2.5 有钙离子存在下的MthK钾离子通道开放状态的晶体生长,数据收集以及初步晶体学分析 | 第84-85页 |
| 3.2.6 MthK钾离子通道孔道结构域的结晶条件的筛选与优化 | 第85-86页 |
| 3.2.7 MthK钾离子通道蛋白晶体防冻剂的选择和晶体冻存 | 第86-87页 |
| 3.3 MthK钾离子通道Ba~(2+)-Na~+和Ba~(2+)-K~+复合物的结构 | 第87-97页 |
| 4 MthK钾离子通道的钡阻断机制的电生理学研究 | 第97-101页 |
| 5 讨论 | 第101-103页 |
| 参考文献 | 第103-113页 |
| 作者简历 | 第113-115页 |
