| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 绪论 | 第14-24页 |
| 1.1 有丝分裂周期及其调控 | 第14-17页 |
| 1.1.1 有丝分裂周期概述 | 第14-16页 |
| 1.1.2 有丝分裂的调控 | 第16-17页 |
| 1.2 膜转运及其调控 | 第17-21页 |
| 1.2.1 顺式转运(anterograde trafficking) | 第18-19页 |
| 1.2.2 逆向转运(retrograde trafficking) | 第19-20页 |
| 1.2.3 细胞自噬 | 第20-21页 |
| 1.3 有丝分裂和膜转运的关联 | 第21-22页 |
| 1.4 在有丝分裂和膜转运中发挥双重功能的蛋白的研究意义 | 第22-24页 |
| 第二章 高尔基体蛋白STK16在有丝分裂和膜转运中的功能研究 | 第24-77页 |
| 2.1 研究背景 | 第24-30页 |
| 2.1.1 高尔基体蛋白的组成及功能概述 | 第24-25页 |
| 2.1.2 高尔基体蛋白在有丝分裂中的功能 | 第25-26页 |
| 2.1.3 Actin可介导高尔基体蛋白对高尔基体功能的作用 | 第26-27页 |
| 2.1.4 高尔基体蛋白在膜转运中的功能 | 第27-28页 |
| 2.1.5 高尔基体蛋白的脂肪酰化修饰和功能 | 第28-29页 |
| 2.1.6 高尔基体蛋白STK16研究进展 | 第29-30页 |
| 2.1.7 本章的主要研究内容 | 第30页 |
| 2.2 材料和方法 | 第30-44页 |
| 2.2.1 实验用载体、细胞株、抑制剂及试剂 | 第30-33页 |
| 2.2.2 表达质粒构建 | 第33页 |
| 2.2.3 病毒包装和稳转过表达细胞系筛选 | 第33-34页 |
| 2.2.4 细胞培养 | 第34页 |
| 2.2.5 野生型或突变体STK16单体和多聚体蛋白的表达和纯化 | 第34-36页 |
| 2.2.6 免疫荧光染色 | 第36-37页 |
| 2.2.7 免疫印迹 | 第37页 |
| 2.2.8 RNA干扰 | 第37-38页 |
| 2.2.9 免疫共沉淀 | 第38页 |
| 2.2.10 体外磷酸化实验 | 第38-39页 |
| 2.2.11 肌动蛋白体外聚合实验 | 第39页 |
| 2.2.12 肌动蛋白体外解聚实验 | 第39-40页 |
| 2.2.13 体外蛋白pull down实验 | 第40页 |
| 2.2.14 同步化实验 | 第40-41页 |
| 2.2.15 RT-PCR | 第41页 |
| 2.2.16 扫描隧道显微镜(STM) | 第41-42页 |
| 2.2.17 细胞周期测定 | 第42页 |
| 2.2.18 VSVG-GFP的顺式转运 | 第42页 |
| 2.2.19 铁转运蛋白(transferrin)胞吞 | 第42-43页 |
| 2.2.20 铁转运蛋白(transferrin)的体内循环 | 第43页 |
| 2.2.21 EGFR降解 | 第43-44页 |
| 2.2.22 统计学分析 | 第44页 |
| 2.3 实验结果 | 第44-71页 |
| 2.3.1 野生型、激酶失活型、RNAi耐受型和抑制剂耐受型STK16在细胞中的定位检测 | 第44-46页 |
| 2.3.2 STK16干扰效率的确定 | 第46页 |
| 2.3.3 STK16干扰或活性抑制同时增加G2期和有丝分裂期(M期)的细胞比例 | 第46-48页 |
| 2.3.4 STK16干扰或激酶活性抑制影响M期各时期细胞比例 | 第48-49页 |
| 2.3.5 STK16干扰或活性抑制延迟细胞进入分裂期并延长分裂期时间 | 第49-51页 |
| 2.3.6 STK16激酶调控高尔基体完整性 | 第51-53页 |
| 2.3.7 STK16可能通过actin影响高尔基体的重组装 | 第53-55页 |
| 2.3.8 体内STK16与肌动蛋白相互作用并调控F-actin的组装 | 第55-57页 |
| 2.3.9 野生型单体和二聚体/多聚体形式STK16蛋白的纯化和表征 | 第57-58页 |
| 2.3.10 STK16在体外以浓度和激酶活性依赖型形式调控actin的聚合和解聚 | 第58-60页 |
| 2.3.11 体外实验显示STK16与actin直接结合且与激酶活性不相关 | 第60-61页 |
| 2.3.12 脂肪酰化位点突变可能影响STK16蛋白的二聚化 | 第61-62页 |
| 2.3.13 酰化位点修饰对actin动力学的影响及其可能机制 | 第62-64页 |
| 2.3.14 酰化位点突变对体内STK16的定位、高尔基体完整性、F-actin和细胞周期的影响 | 第64-65页 |
| 2.3.15 酰化位点突变和激酶失活型突变影响STK16蛋白的核质穿梭 | 第65-67页 |
| 2.3.16 STK16不影响VSVG-GFP在细胞内的顺式转运 | 第67-68页 |
| 2.3.17 STK16参与铁转运蛋白的胞吞和体内循环 | 第68-69页 |
| 2.3.18 STK16影响体内EGFR的转运 | 第69-70页 |
| 2.3.19 STK16可能参与高尔基体-内体转运 | 第70-71页 |
| 2.3.20 STK16参与自噬 | 第71页 |
| 2.4 结果分析与讨论 | 第71-77页 |
| 第三章 G蛋白GNG7在细胞分裂和自噬中的功能研究 | 第77-107页 |
| 3.1 研究背景 | 第77-82页 |
| 3.1.1 G蛋白的组成及传统功能 | 第77-78页 |
| 3.1.2 Gα蛋白的非传统功能 | 第78-79页 |
| 3.1.3 Gβγ二聚体的传统和非传统功能 | 第79-81页 |
| 3.1.4 G蛋白与细胞自噬 | 第81页 |
| 3.1.5 GNG7研究进展 | 第81-82页 |
| 3.1.6 本章的主要研究内容 | 第82页 |
| 3.2 材料和方法 | 第82-88页 |
| 3.2.1 实验用载体、细胞株、抑制剂及试剂 | 第82-83页 |
| 3.2.2 细胞培养 | 第83-84页 |
| 3.2.3 表达质粒构建 | 第84页 |
| 3.2.4 病毒包装和稳转过表达细胞系筛选 | 第84页 |
| 3.2.5 免疫荧光染色 | 第84-85页 |
| 3.2.6 免疫印迹 | 第85页 |
| 3.2.7 RNA干扰 | 第85-86页 |
| 3.2.8 免疫共沉淀 | 第86页 |
| 3.2.9 RT-PCR | 第86页 |
| 3.2.10 同步化实验 | 第86页 |
| 3.2.11 细胞周期测定 | 第86-87页 |
| 3.2.12 细胞凋亡测定 | 第87页 |
| 3.2.13 细胞生长曲线测定 | 第87-88页 |
| 3.2.14 细胞老化检测 | 第88页 |
| 3.2.15 统计学分析 | 第88页 |
| 3.3 研究结果 | 第88-103页 |
| 3.3.1 GNG7过表达抑制肿瘤细胞生长 | 第88-90页 |
| 3.3.2 GNG7过表达将细胞阻滞于有丝分裂期 | 第90-91页 |
| 3.3.3 GNG7干扰诱导双核或多核细胞生成并降低细胞数目 | 第91-95页 |
| 3.3.4 GNG7在分裂期高表达 | 第95-96页 |
| 3.3.5 GNG7影响细胞内F-actin形成 | 第96-97页 |
| 3.3.6 GNG7过表达诱导细胞凋亡 | 第97-98页 |
| 3.3.7 GNG7过表达不会诱导细胞衰老 | 第98-99页 |
| 3.3.8 GNG7诱导自噬 | 第99-100页 |
| 3.3.9 GNG7通过与mTOR复合物相互作用诱导自噬 | 第100-102页 |
| 3.3.10 GNG7干扰降低Rapamycin和饥饿诱导的自噬潮 | 第102-103页 |
| 3.4 结果分析和讨论 | 第103-107页 |
| 结论与展望 | 第107-109页 |
| 参考文献 | 第109-124页 |
| 附录(缩略词表) | 第124-125页 |
| 致谢 | 第125-126页 |
| 在读期间发表的学术论文及取得的其他学术成果 | 第126-127页 |
