| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一部分 前言 | 第10-22页 |
| 1.1 小鹅瘟病毒研究进展 | 第10-11页 |
| 1.2 小鹅瘟病毒理化特性及生物学特性 | 第11页 |
| 1.3 小鹅瘟病毒结构蛋白的分子结构特点 | 第11-13页 |
| 1.4 小鹅瘟的流行病学 | 第13页 |
| 1.5 小鹅瘟的诊断方法 | 第13-16页 |
| 1.5.1 病毒的分离培养与鉴定 | 第13-14页 |
| 1.5.2 电镜检测技术 | 第14页 |
| 1.5.3 血清学诊断 | 第14-16页 |
| 1.5.3.1 琼脂扩散试验 | 第14页 |
| 1.5.3.2 病毒中和试验 | 第14-15页 |
| 1.5.3.3 酶联免疫吸附试验 | 第15页 |
| 1.5.3.4 免疫胶体金试验 | 第15-16页 |
| 1.6 小鹅瘟的综合防治措施 | 第16-17页 |
| 1.7 基因工程疫苗 | 第17-18页 |
| 1.8 高免血清的研究 | 第18-19页 |
| 1.9 诺如病毒(NoV) P-particle研究进展 | 第19-21页 |
| 1.9.1 NoV的分子结构 | 第19-20页 |
| 1.9.2 NoV P-particle的抗原呈递作用 | 第20-21页 |
| 1.10 本研究目的和意义 | 第21-22页 |
| 第二部分 材料和方法 | 第22-37页 |
| 2.1 试验仪器和材料 | 第22-24页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.2 试验材料 | 第23-24页 |
| 2.2 研究方法和内容 | 第24-37页 |
| 2.2.1 小鹅瘟血清学检测 | 第24-25页 |
| 2.2.2 小鹅瘟病毒的增殖与DNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.2.2.1 小鹅瘟病毒的增殖 | 第25页 |
| 2.2.2.2 小鹅瘟病毒DNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.2.3 设计合成PCR引物 | 第26页 |
| 2.2.4 PCR扩增及鉴定 | 第26-27页 |
| 2.2.5 pMD-VP3重组质粒的构建及鉴定 | 第27-31页 |
| 2.2.5.1 PCR产物的纯化 | 第27-28页 |
| 2.2.5.2 VP3目的基因与pMD18-T simple vector的连接 | 第28页 |
| 2.2.5.3 感受态细胞的转化 | 第28-29页 |
| 2.2.5.4 重组质粒pMD-VP3的阳性筛选鉴定 | 第29-30页 |
| 2.2.5.5 重组质粒pMD-VP3的质粒提取 | 第30-31页 |
| 2.2.5.6 重组质粒pMD-VP3的双酶切鉴定 | 第31页 |
| 2.2.5.7 VP3目的片段的凝胶回收 | 第31页 |
| 2.2.6 重组质粒载体的纯化 | 第31-33页 |
| 2.2.6.1 载体质粒的提取 | 第31-32页 |
| 2.2.6.2 P-particle-VP8质粒DNA的双酶切处理 | 第32页 |
| 2.2.6.3 P颗粒载体DNA酶切产物的酚-氯仿抽提 | 第32-33页 |
| 2.2.6.4 P颗粒载体DNA去磷酸化 | 第33页 |
| 2.2.6.5 P颗粒载体的凝胶回收 | 第33页 |
| 2.2.7 重组表达质粒P-particle-VP3的构建 | 第33-35页 |
| 2.2.7.1 P颗粒载体与目的片段的连接 | 第33-34页 |
| 2.2.7.2 连接反应液转化DH5α感受态细胞 | 第34页 |
| 2.2.7.3 P-particle-VP3阳性克隆的筛选鉴定 | 第34页 |
| 2.2.7.4 P-particle-VP3的质粒提取 | 第34页 |
| 2.2.7.5 重组表达质粒P-particle-VP3的双酶切鉴定 | 第34页 |
| 2.2.7.6 保存P-particle-VP3重组表达质粒 | 第34-35页 |
| 2.2.7.7 重组质粒P-particle-VP3转化BL21 | 第35页 |
| 2.2.7.8 重组菌的表达筛选 | 第35页 |
| 2.2.8 P-particle-VP3菌液测序以及同源性分析 | 第35页 |
| 2.2.9 重组表达蛋白的表达与鉴定 | 第35-37页 |
| 2.2.9.1 重组蛋白表达条件的优化 | 第35-36页 |
| 2.2.9.1.1 重组蛋白最适IPTG浓度的优化 | 第35页 |
| 2.2.9.1.2 重组蛋白最适表达时间的优化 | 第35-36页 |
| 2.2.9.2 重组蛋白SDS-PAGE鉴定 | 第36-37页 |
| 第三部分 实验结果与分析 | 第37-47页 |
| 3.1 小鹅瘟血清学检测结果 | 第37-39页 |
| 3.2 VP3片段PCR扩增结果 | 第39页 |
| 3.3 重组质粒pMD-VP3菌落PCR鉴定 | 第39-40页 |
| 3.4 重组质粒pMD-VP3质粒双酶切鉴定 | 第40-41页 |
| 3.5 P-particle-VP8质粒双酶切 | 第41-42页 |
| 3.6 重组质粒P-particle-VP3（DH5α）菌落PCR鉴定 | 第42页 |
| 3.7 重组表达质粒P-particle-VP3质粒双酶切鉴定 | 第42-43页 |
| 3.8 重组质粒P-particle-VP3（BL21）菌落PCR鉴定 | 第43-44页 |
| 3.9 测序 | 第44-45页 |
| 3.10 重组蛋白表达条件的优化 | 第45-47页 |
| 3.10.1 重组蛋白最适IPTG浓度的优化 | 第45-46页 |
| 3.10.2 重组蛋白最适表达时间的优化 | 第46-47页 |
| 第四部分 讨论 | 第47-50页 |
| 4.1 血清学调查分析 | 第47-48页 |
| 4.2 新型P-particle-VP3重组质粒的研究展望 | 第48-50页 |
| 致谢 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 附录 | 第58-59页 |
| 1 P Particle-VP3插入片段测序结果 | 第58页 |
| 2 VP3同源性分析 | 第58-59页 |
