| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-12页 |
| 缩略词表 | 第13-14页 |
| 第一篇 文献综述 | 第14-50页 |
| 第一章 干扰素的概述 | 第14-38页 |
| 1 干扰素的发现 | 第14-15页 |
| 2 干扰素的分类及分子结构 | 第15-18页 |
| 2.1 干扰素的分类 | 第15-16页 |
| 2.2 Ⅰ型干扰素的分子结构 | 第16-17页 |
| 2.3 Ⅱ型干扰素的分子结构 | 第17-18页 |
| 2.4 Ⅲ型干扰素的分子结构 | 第18页 |
| 3 干扰素的理化性质 | 第18页 |
| 4 干扰素的生成机理 | 第18-19页 |
| 4.1 TLR介导的信号传导途径 | 第18-19页 |
| 4.2 核酸结合蛋白途径的信号传导 | 第19页 |
| 5 干扰素的受体及其分布 | 第19-21页 |
| 6 干扰素的信号传导通路 | 第21-23页 |
| 6.1 经典的JAK-STAT信号传导通路 | 第21-22页 |
| 6.2 CRK介导的信号传导通路 | 第22-23页 |
| 7 干扰素的生物学活性与功能 | 第23-28页 |
| 7.1 干扰素的抗病毒作用 | 第23-25页 |
| 7.2 干扰素的抗肿瘤和抗增殖活性 | 第25-27页 |
| 7.3 干扰素的免疫调节作用 | 第27页 |
| 7.4 干扰素抗细菌、寄生虫作用 | 第27-28页 |
| 7.5 干扰素的其他作用 | 第28页 |
| 8 干扰素的研究进展与应用 | 第28-30页 |
| 9 小结 | 第30-31页 |
| 参考文献 | 第31-38页 |
| 第二章 单克隆抗体的概述 | 第38-50页 |
| 1 单克隆抗体的基本原理和特点 | 第38-39页 |
| 1.1 单克隆抗体的基本原理 | 第38页 |
| 1.2 单克隆抗体的基本特点 | 第38-39页 |
| 2 单克隆抗体的发展 | 第39-42页 |
| 2.1 单克隆抗体制备技术的发展 | 第39-41页 |
| 2.1.1 嵌合抗体技术 | 第39-40页 |
| 2.1.2 噬菌体抗体库技术 | 第40页 |
| 2.1.3 核糖体展示技术 | 第40页 |
| 2.1.4 RNA-多肽融合技术 | 第40页 |
| 2.1.5 转基因小鼠制备全人抗体 | 第40-41页 |
| 2.2 单克隆抗体种类的发展 | 第41-42页 |
| 3 单克隆抗体的应用 | 第42-43页 |
| 3.1 单克隆抗体在预防方面的应用 | 第42页 |
| 3.2 单克隆抗体在临床治疗方面的应用 | 第42-43页 |
| 3.3 单克隆抗体在免疫研究方面的应用 | 第43页 |
| 3.4 单克隆抗体在检测与诊断方面的应用 | 第43页 |
| 4 动物细胞因子单克隆抗体的研究与应用 | 第43-45页 |
| 参考文献 | 第45-50页 |
| 第二篇 试验部分 | 第50-92页 |
| 第一章 兔γ干扰素的原核表达 | 第50-66页 |
| 1 材料与方法 | 第51-58页 |
| 1.1 试验动物 | 第51页 |
| 1.2 质粒及菌种 | 第51页 |
| 1.3 主要试剂和仪器 | 第51页 |
| 1.4 淋巴细胞的分离和培养 | 第51页 |
| 1.5 IFN-γ RNA提取 | 第51-52页 |
| 1.6 RT-PCR | 第52-53页 |
| 1.6.1 反转录 | 第52页 |
| 1.6.2 引物设计 | 第52-53页 |
| 1.6.3 PCR | 第53页 |
| 1.7 重组载体pET-28a-IFN-γ的构建 | 第53-57页 |
| 1.7.1 PCR产物回收 | 第53-54页 |
| 1.7.2 PCR回收产物及pET-28a质粒的酶切 | 第54-55页 |
| 1.7.3 IFN-γ基因及pET-28a质粒酶切产物的连接 | 第55页 |
| 1.7.4 IFN-γ基因及pET-28a质粒连接产物转化DH5α | 第55页 |
| 1.7.5 重组质粒pET-28a-IFN-γ提取 | 第55-56页 |
| 1.7.6 重组质粒pET-28a-IFN-酶切及测序鉴定 | 第56-57页 |
| 1.8 重组IFN-γ蛋白的表达及可溶性鉴定 | 第57-58页 |
| 1.8.1 重组IFN-γ蛋白的诱导表达 | 第57页 |
| 1.8.2 SDS-PAGE电泳 | 第57页 |
| 1.8.3 重组IFN-γ蛋白可溶性鉴定 | 第57-58页 |
| 1.9 重组IFN-γ蛋白的纯化 | 第58页 |
| 2 试验结果 | 第58-62页 |
| 2.1 重组表达载体pET-28a-IFN-γ的构建 | 第58-60页 |
| 2.2 重组IFN-γ蛋白诱导表达及诱导时间优化 | 第60页 |
| 2.3 重组IFN-γ蛋白可溶性鉴定 | 第60-61页 |
| 2.4 重组IFN-γ蛋白纯化结果 | 第61-62页 |
| 3 讨论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-66页 |
| 第二章 兔γ干扰素抗病毒活性研究 | 第66-78页 |
| 1 材料与方法 | 第66-69页 |
| 1.1 试验用细胞和病毒 | 第66-67页 |
| 1.2 主要试剂和仪器 | 第67页 |
| 1.3 重组干扰素提取 | 第67页 |
| 1.3.1 包涵体提取 | 第67页 |
| 1.3.2 包涵体洗涤和溶解 | 第67页 |
| 1.4 目的蛋白的复性 | 第67-68页 |
| 1.4.1 透析袋处理 | 第67页 |
| 1.4.2 目的蛋白透析复性 | 第67-68页 |
| 1.5 VSV在VERO和MDCK细胞上TCID_(50)的测定 | 第68-69页 |
| 1.5.1 VERO(非洲绿猴肾细胞)和MDCK(犬肾细胞)的培养 | 第68页 |
| 1.5.2 VSV的扩增与保存 | 第68页 |
| 1.5.3 VSV在VERO和MDCK细胞上TCID_(50)的测定 | 第68-69页 |
| 1.6 重组兔γ干扰素蛋白抗病毒活性的测定 | 第69页 |
| 2 试验结果 | 第69-74页 |
| 2.1 VSV病毒TCID_(50)的测定 | 第69-71页 |
| 2.1.1 VERO细胞上VSV TCID_(50)的测定结果 | 第69-70页 |
| 2.1.2 MDCK细胞上VSV TCID_(50)的测定结果 | 第70-71页 |
| 2.2 重组兔γ干扰素抗病毒活性测定 | 第71-74页 |
| 2.2.1 VSV/VERO系统上重组兔γ干扰素的抗病毒活性测定 | 第71-72页 |
| 2.2.2 VSV/MDCK系统上重组兔γ干扰素的抗病毒活性测定 | 第72-74页 |
| 3 讨论 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-78页 |
| 第三章 兔γ干扰素蛋白单克隆抗体制备与鉴定 | 第78-92页 |
| 1 材料与方法 | 第79-84页 |
| 1.1 实验动物 | 第79页 |
| 1.2 细胞及蛋白 | 第79页 |
| 1.3 主要试剂 | 第79页 |
| 1.4 免疫动物 | 第79页 |
| 1.5 间接ELISA检测方法的建立 | 第79-80页 |
| 1.6 杂交瘤细胞株的建立 | 第80-82页 |
| 1.6.1 饲养细胞制备 | 第80页 |
| 1.6.2 SP2/0细胞准备 | 第80-81页 |
| 1.6.3 个鼠脾脏淋巴细胞分离 | 第81页 |
| 1.6.4 细胞融合 | 第81-82页 |
| 1.6.5 杂交瘤细胞株的筛选 | 第82页 |
| 1.6.6 阳性杂交瘤细胞的亚克隆 | 第82页 |
| 1.7 杂交瘤细胞的冻存与复苏 | 第82-83页 |
| 1.7.1 细胞冻存 | 第82页 |
| 1.7.2 细胞复苏 | 第82-83页 |
| 1.8 单克隆抗体腹水的制备 | 第83页 |
| 1.9 单克隆抗体特性鉴定 | 第83-84页 |
| 1.9.1 腹水中单克隆抗体效价测定 | 第83页 |
| 1.9.2 腹水型单克隆抗体Western blot特异性检测 | 第83页 |
| 1.9.3 单克隆抗体亚型检测 | 第83-84页 |
| 1.9.4 单克隆抗体抗原识别位点分析 | 第84页 |
| 1.9.5 杂交瘤细胞株分泌抗体稳定性测定 | 第84页 |
| 2 试验结果 | 第84-87页 |
| 2.1 间接ELISA方法建立 | 第84-85页 |
| 2.2 细胞融合率、阳性率及单抗筛选 | 第85页 |
| 2.3 单克隆抗体特异性鉴定 | 第85-86页 |
| 2.4 单抗亚型及腹水效价测定 | 第86页 |
| 2.5 单克隆抗体抗原识别位点分析 | 第86-87页 |
| 2.6 杂交瘤细胞株稳定性鉴定 | 第87页 |
| 3 讨论 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-92页 |
| 全文总结 | 第92-94页 |
| 附录 常用试剂的配制 | 第94-98页 |
| 致谢 | 第98页 |
