| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-5页 |
| 英文缩写对照表 | 第5-11页 |
| 前言 | 第11-20页 |
| 1 犬瘟热病毒概述 | 第11-19页 |
| ·犬瘟热病毒的分子生物学特征 | 第11-13页 |
| ·CDV的分类与形态结构 | 第11-12页 |
| ·CDV基因组结构与功能 | 第12-13页 |
| ·融合蛋白（F） | 第12-13页 |
| ·附着或血凝蛋白（H） | 第13页 |
| ·核衣壳蛋白（N） | 第13页 |
| ·其他结构与非结构蛋白 | 第13页 |
| ·犬瘟热的流行病学 | 第13-14页 |
| ·犬瘟热的致病机理 | 第14页 |
| ·犬瘟热的临床症状与病理变化 | 第14-15页 |
| ·犬瘟热的诊断方法 | 第15页 |
| ·病毒的分离 | 第15页 |
| ·抗原检测 | 第15页 |
| ·病毒核酸的检测 | 第15页 |
| ·血清学诊断 | 第15页 |
| ·犬瘟热的预防与控制 | 第15页 |
| ·犬瘟热疫苗的研究进展 | 第15-17页 |
| ·亚单位疫苗 | 第16页 |
| ·DNA疫苗 | 第16-17页 |
| ·重组活载体疫苗 | 第17页 |
| ·山羊痘病毒载体研究进展 | 第17-19页 |
| ·GTPV的基本特征 | 第17-18页 |
| ·GTPV的基因组 | 第18页 |
| ·GTPV载体的构建技术 | 第18-19页 |
| ·GTPV载体的应用 | 第19页 |
| 2 研究目的和意义 | 第19-20页 |
| 第一章 犬瘟热重组山羊痘病毒转移载体pTK-H-Eg与pTK-F-Eg构建与鉴定 | 第20-40页 |
| 1 引言 | 第20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-34页 |
| ·材料 | 第20-21页 |
| ·质粒 | 第20页 |
| ·试剂和试剂盒 | 第20页 |
| ·主要仪器设备 | 第20-21页 |
| ·方法 | 第21-34页 |
| ·主要试剂的配制 | 第21页 |
| ·基因的合成 | 第21-22页 |
| ·引物设计与合成 | 第22页 |
| ·转移载体骨架的pMDTK-PEL的构建 | 第22-26页 |
| ·转移载体质粒pMDTK-PEL-EGFP酶切与回收 | 第22-23页 |
| ·转移载体质粒pMDTK-PEL-EGFP补平与回收 | 第23-24页 |
| ·转移载体质粒pMDTK-PEL-EGFP补平后的酶切与回收 | 第24页 |
| ·转移载体pMDTK-PEL的自身环化连接 | 第24-25页 |
| ·DH5α感受态细胞的制备 | 第25页 |
| ·连接产物pMDTK-PEL转化DH5α感受态细胞 | 第25-26页 |
| ·重组质粒pMDTK-PEL的小量抽提 | 第26页 |
| ·重组质粒pMDTK-PEL的序列测定 | 第26页 |
| ·重组转移载体质粒pMDTK-PELH与pMDTK-PELF的构建 | 第26-28页 |
| ·目的基因H、F与载体pMDTK-PEL连接 | 第28页 |
| ·连接产物pMDTK-PELH与pMDTK-PELF转化DH5α感受态细胞 | 第28页 |
| ·重组质粒pMDTK-PELH与pMDTK-PELF的小量抽提 | 第28页 |
| ·重组质粒pMDTK-PELH与pMDTK-PELF的序列测定 | 第28页 |
| ·重组转移载体质粒pTK-H-Eg和pTK-F-Eg的构建 | 第28-34页 |
| ·转移载体质粒pMDTK-PELH酶切与回收 | 第28-29页 |
| ·转移载体质粒pMDTK-PELH补平与回收 | 第29页 |
| ·表达盒PELH的获得 | 第29-30页 |
| ·转移载体质粒pMDTK-PELF酶切与回收 | 第30页 |
| ·转移载体质粒pMDTK-PELF补平与回收 | 第30页 |
| ·表达盒PELF的获得 | 第30-31页 |
| ·表达盒PELH、PELF与载体pTK-Eg连接 | 第31页 |
| ·连接产物pTK-H-Eg和pTK-F-Eg转化DH5α感受态细胞 | 第31页 |
| ·重组质粒pTK-H-Eg和pTK-F-Eg的小量抽提 | 第31页 |
| ·重组质粒pTK-H-Eg和pTK-F-Eg的序列测定 | 第31-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-38页 |
| ·载体质粒pMDTK-PEL的构建结果 | 第34页 |
| ·重组转移载体质粒pMDTK-PELH与pMDTK-PELF的构建结果 | 第34-35页 |
| ·重组转移载体质粒pTK-H-Eg与pTK-F-Eg的构建结果 | 第35-38页 |
| 4 讨论 | 第38-40页 |
| ·目的基因H、F的选择 | 第38页 |
| ·重组山羊痘病毒转移载体的构建 | 第38-40页 |
| 第二章 犬瘟热病毒H、F基因重组山羊痘病毒的构建与鉴定 | 第40-54页 |
| 1 引言 | 第40页 |
| 2 材料与方法 | 第40-48页 |
| ·材料 | 第40-41页 |
| ·细胞和毒株 | 第40页 |
| ·试剂和试剂盒 | 第40-41页 |
| ·主要仪器设备 | 第41页 |
| ·方法 | 第41-48页 |
| ·常用试剂溶液的配制 | 第41-42页 |
| ·SDS-PAGE和Western blot所需的试剂和溶液 | 第42页 |
| ·引物设计与合成 | 第42-43页 |
| ·无内毒素重组质粒pTK-H-Eg和pTK-F-Eg的中量制备 | 第43页 |
| ·Vero、BHK细胞的复苏、传代及冻存 | 第43-44页 |
| ·原代犊牛睾丸（bovine testicle，BT）细胞的制备 | 第44-45页 |
| ·山羊痘病毒GTPV AV41的增殖及滴度的测定 | 第45页 |
| ·重组GTPV的制备、纯化和鉴定 | 第45-47页 |
| ·同源重组 | 第45-46页 |
| ·重组病毒的加压筛选和纯化 | 第46-47页 |
| ·重组病毒vpTK-H-Eg与vpTK-F-Eg的Western blot鉴定 | 第47-48页 |
| 3 结果与分析 | 第48-52页 |
| ·GTPV AV41滴度的测定结果 | 第48页 |
| ·重组病毒vpTK-H-Eg和vpTK-F-Eg的制备结果 | 第48-49页 |
| ·重组病毒vpTK-H-Eg和vpTK-F-Eg纯化的结果 | 第49-50页 |
| ·重组病毒vpTK-H-Eg和vpTK-F-Eg鉴定的结果 | 第50-51页 |
| ·重组病毒vpTK-H-Eg与vpTK-F-Eg的Western blot结果 | 第51-52页 |
| 4 讨论 | 第52-54页 |
| ·山羊痘病毒活载体的选择 | 第52-53页 |
| ·重组山羊痘病毒的构建与鉴定 | 第53页 |
| ·表达产物的检测 | 第53-54页 |
| 全文总结 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 附录 | 第61-65页 |
