| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| 符号说明 | 第11-12页 |
| 前言 | 第12-17页 |
| 1. 氟化学和生物学 | 第12-13页 |
| 2. 氟的生化和医学应用 | 第13-15页 |
| 3. 氟的代谢插入 | 第15-16页 |
| 4. 基因密码子扩展技术插入 | 第16页 |
| 5. 七次跨膜受体与arrestin介导的通路 | 第16-17页 |
| 实验材料和方法 | 第17-30页 |
| 1. 实验材料 | 第17-18页 |
| ·主要实验试剂 | 第17页 |
| ·主要仪器和设备 | 第17页 |
| ·序列 | 第17-18页 |
| 2. 实验方法 | 第18-30页 |
| ·基因克隆 | 第18-24页 |
| ·酪氨酸酚裂解酶的表达 | 第24页 |
| ·酪氨酸酚裂解酶的纯化 | 第24页 |
| ·TPL(酪氨酸酚裂解酶)合成非天然氨基酸实验 | 第24-25页 |
| ·二氟代酪氨酸等酪氨酸类似物纯化实验 | 第25页 |
| ·荧光标记步骤 | 第25-26页 |
| ·分子排阻层析 | 第26-27页 |
| ·核磁样品准备 | 第27页 |
| ·大肠杆菌基因敲除实验 | 第27-30页 |
| 结果 | 第30-60页 |
| 1. 酪氨酸酚裂解酶工作 | 第30-34页 |
| ·酪氨酸酚裂解酶载体构建 | 第30-32页 |
| ·酪氨酸酚裂解酶试表达 | 第32-33页 |
| ·酪氨酸酚裂解酶酶活测定 | 第33-34页 |
| 2. 酪氨酸酚裂解酶合成二氟代酪氨酸 | 第34-37页 |
| ·二氟代酪氨酸的合成 | 第34-35页 |
| ·二氟代酪氨酸的纯化 | 第35-37页 |
| 3. 二氟代酪氨酸生物功能应用 | 第37-52页 |
| ·在beta-arrestin1蛋白中试插入二氟代酪氨酸 | 第37-41页 |
| ·二氟代酪氨酸对beta-arrestin1构象变化与化学位移的关系 | 第41-49页 |
| ·二氟代酪氨酸对beta-arrestin1构象变化的上的应用 | 第49-52页 |
| 4. 荧光淬灭方法验证beta-arrestin1构象变化 | 第52-56页 |
| ·分子构建 | 第52-54页 |
| ·荧光标记预实验 | 第54-56页 |
| 5. 代谢插入氟代色氨酸实验 | 第56-60页 |
| ·色氨酸缺陷菌株的制备 | 第56-57页 |
| ·色氨酸缺陷菌株验证 | 第57页 |
| ·使用代谢插入,在iLOV上插入氟代色氨酸 | 第57-60页 |
| 讨论 | 第60-63页 |
| 1. 酪氨酸酚裂解酶的应用 | 第60页 |
| 2. 二氟代酪氨酸的化学位移与蛋白质构象变化的关系 | 第60-61页 |
| 3. 二氟代酪氨酸在检测beta-arrestin1结构变化的应用 | 第61-62页 |
| 4. 通过荧光淬灭实验,验证核磁实验的正确性 | 第62页 |
| 5. 氟代色氨酸的代谢插入 | 第62-63页 |
| 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文 | 第74页 |
| 参加会议 | 第74-75页 |
| 学位论评阅及答辩情况表 | 第75页 |
