| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 英文缩略词 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-37页 |
| ·抗菌肽的研究进展 | 第13-23页 |
| ·抗菌肽的结构 | 第13页 |
| ·抗菌肽的来源 | 第13-14页 |
| ·抗菌肽的生物学功能 | 第14-17页 |
| ·抗菌肽的作用机制 | 第17-20页 |
| ·抗菌肽的遗传基础 | 第20-22页 |
| ·抗菌肽的应用 | 第22-23页 |
| ·防御素的研究进展 | 第23-27页 |
| ·防御素的结构 | 第23-24页 |
| ·防御素的表达模式及生物活性 | 第24-26页 |
| ·防御素是免疫系统的重要组成成分 | 第26页 |
| ·防御素结构与功能关系 | 第26-27页 |
| ·HNP4的研究进展 | 第27页 |
| ·转基因动物的研究进展 | 第27-28页 |
| ·转基因技术的发展 | 第28-30页 |
| ·体细胞核移植技术 | 第28-29页 |
| ·胚胎干细胞技术 | 第29页 |
| ·精子载体法技术 | 第29-30页 |
| ·原始生殖细胞技术 | 第30页 |
| ·人工染色体技术 | 第30页 |
| ·转基因鸡的研究进展 | 第30-34页 |
| ·鸡的生殖系统 | 第30-32页 |
| ·转基因鸡技术的发展 | 第32-34页 |
| ·转基因鸡的研究意义 | 第34-36页 |
| ·转基因鸡可作为重要的输卵管生物反应器的研究 | 第34-35页 |
| ·转基因鸡可作为育种的新方法 | 第35页 |
| ·转基因鸡作为研究发育生物学重要的模式生物 | 第35-36页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第36-37页 |
| 第二章 材料与方法 | 第37-65页 |
| 引言 | 第37页 |
| ·实验材料 | 第37-42页 |
| ·菌株和质粒 | 第37页 |
| ·实验动物与细胞系 | 第37页 |
| ·实验仪器 | 第37-38页 |
| ·实验药品及试剂 | 第38-40页 |
| ·实验试剂的配制 | 第40-42页 |
| ·实验数据分析软件 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-65页 |
| ·禽类血液DNA的提取(酚仿抽提) | 第42-43页 |
| ·禽类血液DNA的提取 | 第43页 |
| ·禽类血液DNA的提取 | 第43页 |
| ·DNA快速提取法(HotSHOT法) | 第43-44页 |
| ·DH5α感受态细胞的制备 | 第44页 |
| ·普通PCR步骤 | 第44-45页 |
| ·DNA片段回收 | 第45-46页 |
| ·连接反应 | 第46页 |
| ·转化反应 | 第46页 |
| ·质粒小量提取 | 第46-47页 |
| ·无内毒素质粒提取 | 第47页 |
| ·质粒的大量提取 | 第47-48页 |
| ·Southern blot(DIG-Labeled Southern Blot) | 第48-50页 |
| ·Genome walking | 第50-52页 |
| ·细胞RNA的提取 | 第52页 |
| ·组织RNA的提取 | 第52-53页 |
| ·反转录 | 第53-54页 |
| ·定量PCR步骤 | 第54-55页 |
| ·组织和细胞总蛋白提取(RIPA提取) | 第55页 |
| ·蛋白定量(BCA法蛋白定量) | 第55页 |
| ·Western blot步骤 | 第55-56页 |
| ·细胞复苏与传代培养 | 第56-57页 |
| ·细胞转染 | 第57页 |
| ·酶联免疫吸附测定(ELISA) | 第57-58页 |
| ·免疫荧光 | 第58-59页 |
| ·慢病毒的包装过程 | 第59-60页 |
| ·慢病毒滴度测定 | 第60-61页 |
| ·转基因鸡制备流程 | 第61-65页 |
| 第三章 输卵管中特异性表达人防御素4转基因鸡的制备 | 第65-97页 |
| 引言 | 第65页 |
| ·载体构建 | 第65-75页 |
| ·克隆Ova启动子 | 第67-68页 |
| ·验证Ova启动子序列 | 第68-69页 |
| ·构建pWPXL-Ova-GFP表达载体 | 第69-70页 |
| ·验证pWPXL-Ova-GFP表达载体 | 第70-72页 |
| ·合成成熟的HNP4基因序列 | 第72-73页 |
| ·构建了pBud4.1-CMV-HNP4-EF1α-GFP双表达载体 | 第73页 |
| ·验证重组HNP4在细胞水平的表达 | 第73-74页 |
| ·构建了pWPXL-Ova-HNP4和pWPXL-Ova-HNP4-His表达载体 | 第74-75页 |
| ·慢病毒包装 | 第75-77页 |
| ·包装慢病毒载体并进行滴度鉴定 | 第75-76页 |
| ·慢病毒滴度测定 | 第76-77页 |
| ·G_0代转基因鸡的制备与鉴定 | 第77-81页 |
| ·G_0代转基因鸡的制备 | 第77-79页 |
| ·鉴定G_0代鸡胚 | 第79页 |
| ·鉴定G_0代育成鸡 | 第79-80页 |
| ·筛选生殖嵌合的G_0转基因公鸡 | 第80-81页 |
| ·G_1代转基因鸡制备与鉴定 | 第81-87页 |
| ·PCR鉴定G_1代转基因阳性鸡 | 第81-82页 |
| ·Southern blot鉴定G_1代转基因阳性鸡 | 第82-83页 |
| ·Genome Walking验证外源基因插入位点 | 第83-87页 |
| ·G_2代转基因鸡的制备与鉴定 | 第87-89页 |
| ·G_2代转基因鸡的制备 | 第87-88页 |
| ·Southern blot鉴定G_2代转基因鸡 | 第88-89页 |
| ·HNP4在G_1和G_2代转基因鸡中的表达分析 | 第89-94页 |
| ·检测HNP4在转录水平的表达 | 第89-92页 |
| ·检测HNP4蛋白水平表达状况 | 第92-94页 |
| ·转基因鸡家系的系谱图 | 第94-97页 |
| 第四章 讨论 | 第97-101页 |
| ·Ova启动子及表达活性的分析 | 第97页 |
| ·制备转基因鸡条件的优化 | 第97-98页 |
| ·G_0代嵌合体鸡的分析 | 第98-99页 |
| ·G_1代转基因鸡的分析 | 第99页 |
| ·HNP4转基因鸡的表达分析 | 第99页 |
| ·基因沉默的分析 | 第99-101页 |
| 第五章 实验结论 | 第101-103页 |
| 参考文献 | 第103-113页 |
| 附录 | 第113-127页 |
| 致谢 | 第127-129页 |
| 个人简历 | 第129页 |
