| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 引言 | 第14-19页 |
| 参考文献 | 第17-19页 |
| 第一部分 miR-99a在肾癌中的表达及临床意义 | 第19-33页 |
| 材料 | 第19-22页 |
| 一、一般材料 | 第19-21页 |
| 二、实验主要试剂 | 第21页 |
| 三、实验主要仪器 | 第21-22页 |
| 四、各实验所需的主要试剂以及溶液的配置 | 第22页 |
| 方法 | 第22-27页 |
| 一、细胞培养 | 第22-24页 |
| 二、q RT–PCR检测mi R-99a的m RNA表达 | 第24-27页 |
| 三、统计方法 | 第27页 |
| 结果 | 第27-29页 |
| 一、q RT-PCR检测mi R-99a在HK-2、786-0 和OS-RC-2 中的表达 | 第27-28页 |
| 二、q RT-PCR检测mi R-99a在40例肾癌及相应癌旁组织标本中的表达 | 第28-29页 |
| 讨论 | 第29-30页 |
| 小结 | 第30-31页 |
| 参考文献 | 第31-33页 |
| 第二部分 miR-99a对肾癌细胞功能及肿瘤进展的影响 | 第33-55页 |
| 材料 | 第33-36页 |
| 一、一般材料 | 第33页 |
| 二、实验主要试剂 | 第33-34页 |
| 三、实验主要仪器 | 第34页 |
| 四、各实验所需主要试剂及溶液的配置 | 第34-36页 |
| 方法 | 第36-41页 |
| 一、细胞培养 | 第36-37页 |
| 二、脂质体转染细胞 | 第37-38页 |
| 三、CCK-8 细胞增殖检测 | 第38页 |
| 四、克隆形成检测 | 第38-39页 |
| 五、transwell细胞迁移检测 | 第39页 |
| 六、transwell细胞侵袭检测 | 第39-40页 |
| 七、流式细胞检测 | 第40页 |
| 八、动物实验方法 | 第40-41页 |
| 九、统计方法 | 第41页 |
| 结果 | 第41-52页 |
| 一、上调mi R-99a表达对肾癌细胞增殖的影响 | 第41-43页 |
| 二、上调mi R-99a表达对肾癌细胞存活的影响 | 第43-45页 |
| 三、上调mi R-99a表达对肾癌细胞迁移的影响 | 第45-48页 |
| 四、上调mi R-99a表达对肾癌细胞侵袭的影响 | 第48-50页 |
| 五、上调mi R-99a表达对肾癌细胞周期的影响 | 第50-51页 |
| 六、动物实验显示上调mi R-99a表达对裸鼠成瘤的影响 | 第51-52页 |
| 讨论 | 第52-53页 |
| 小结 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-55页 |
| 第三部分 miR-99a调控肾癌进展相关 信号通路的机制研究 | 第55-87页 |
| 材料 | 第55-59页 |
| 一、一般材料 | 第55页 |
| 二、实验主要试剂 | 第55-57页 |
| 三、实验主要仪器 | 第57-58页 |
| 四、各实验所需主要试剂及溶液的配置 | 第58-59页 |
| 方法 | 第59-69页 |
| 一、生物信息搜索 | 第59-60页 |
| 二、荧光素酶活性实验 | 第60页 |
| 三、Western blot检测 | 第60-63页 |
| 四、细胞培养 | 第63-65页 |
| 五、脂质体转染细胞 | 第65-66页 |
| 六、CCK-8 细胞增殖检测 | 第66页 |
| 七、克隆形成检测 | 第66页 |
| 八、transwell细胞迁移检测 | 第66-67页 |
| 九、transwell细胞侵袭检测 | 第67-68页 |
| 十、流式细胞检测 | 第68页 |
| 十一、动物实验方法 | 第68-69页 |
| 十二、统计方法 | 第69页 |
| 结果 | 第69-81页 |
| 一、通过生物信息搜索mi R-99a的靶基因 | 第69页 |
| 二、检测HK-2、786-0 及OS-RC-2 中m TOR的表达水平 | 第69-70页 |
| 三、肾癌细胞及动物模型中上调miR-99a 对 mTOR 表达水平的影响 | 第70-73页 |
| 四、荧光素酶活性实验验证mi R-99a的靶基因 | 第73-74页 |
| 五、上调mi R-99a对m TOR信号通路相关因子及细胞周期相关蛋白表达水平的影响 | 第74-76页 |
| 六、下调m TOR表达对肾癌细胞增殖的影响 | 第76-77页 |
| 七、下调m TOR表达对肾癌细胞存活的影响 | 第77-78页 |
| 八、下调m TOR表达对肾癌细胞迁移的影响 | 第78-79页 |
| 九、下调m TOR表达对肾癌细胞侵袭的影响 | 第79-80页 |
| 十、下调m TOR表达对肾癌细胞周期的影响 | 第80-81页 |
| 讨论 | 第81-84页 |
| 小结 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-87页 |
| 全文结论 | 第87-88页 |
| 综述 | 第88-101页 |
| 参考文献 | 第96-101页 |
| 英文缩略词表 | 第101-103页 |
| 攻读学位期间公开发表的论文 | 第103-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
