| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-18页 |
| 前言 | 第18-23页 |
| 第一部分 MACC1、HGF和c-Met在宫颈癌的表达及其与HPV感染的关系 | 第23-53页 |
| 实验材料 | 第24-29页 |
| 1 实验标本 | 第24-25页 |
| ·标本来源 | 第24页 |
| ·临床病理资料 | 第24页 |
| ·病例筛选 | 第24-25页 |
| 2 主要试剂 | 第25-27页 |
| ·试剂来源 | 第25-26页 |
| ·主要试剂配制 | 第26-27页 |
| 3 主要仪器 | 第27-29页 |
| 实验方法 | 第29-36页 |
| 1 免疫组织化学反应 | 第29-34页 |
| ·石蜡标本的制备 | 第30页 |
| ·HE染色 | 第30-32页 |
| ·免疫组织化学染色 | 第32-33页 |
| ·免疫组织化学对照 | 第33-34页 |
| ·结果判定 | 第34页 |
| 2 聚合酶链反应(PCR) | 第34-36页 |
| ·组织DNA的提取 | 第34-35页 |
| ·PCR扩增反应 | 第35-36页 |
| ·实验结果判定 | 第36页 |
| 3 统计学分析 | 第36页 |
| 实验结果 | 第36-46页 |
| 1 免疫组化结果 | 第36-43页 |
| ·MACC1在正常宫颈组织、CIN组织和宫颈癌组织中表达情况 | 第36-38页 |
| ·HGF在正常宫颈组织、CIN组织和宫颈癌组织中的表达情况 | 第38-40页 |
| ·C-Met在正常宫颈组织、CIN组织和宫颈癌组织中的表达情况 | 第40-41页 |
| ·MACC1、c-Met和HGF的异常表达与宫颈癌各临床病理特征的关系 | 第41-42页 |
| ·宫颈癌组织中MACC1和c-Met蛋白表达的相关性 | 第42页 |
| ·宫颈癌组织中MACC1和HGF蛋白表达的相关性 | 第42-43页 |
| ·宫颈癌组织中c-Met和HGF蛋白表达的相关性 | 第43页 |
| 2 PCR检测结果 | 第43-45页 |
| ·HPV DNA在正常宫颈组织、CIN组织和宫颈癌组织中的检测情况 | 第43-44页 |
| ·HPV DNA与宫颈癌各临床病理特征的关系 | 第44-45页 |
| 3 MACC1、c-Met和HGF在宫颈癌中高表达与HPV DNA阳性表达率的相关性 | 第45-46页 |
| ·宫颈癌组织中MACC1蛋白和HPV DNA表达的相关性 | 第45-46页 |
| ·宫颈癌组织中c-Met蛋白和HPV DNA表达的相关性 | 第46页 |
| ·宫颈癌组织中HGF蛋白和HPV DNA表达的相关性 | 第46页 |
| 讨论 | 第46-52页 |
| 1 HPV的结构与功能 | 第47-48页 |
| 2 MACC1的结构与功能 | 第48-49页 |
| 3 C-Met和HGF的结构与功能 | 第49页 |
| 4 MACC1和HGF/c-Met的关系 | 第49-50页 |
| 5 MACC1和宫颈癌的关系 | 第50页 |
| 6 HGF/c-Met和宫颈癌的关系 | 第50-51页 |
| 7 MACC1-HGF/c-Met-HPV和和宫颈癌的关系 | 第51-52页 |
| 小结 | 第52-53页 |
| 第二部分 RNA干扰MACC1基因对HeLa细胞生物学行为的影响研究 | 第53-88页 |
| 实验材料 | 第53-58页 |
| 1 细胞来源及培养 | 第53页 |
| 2 实验试剂 | 第53-58页 |
| ·试剂和材料的来源 | 第53-56页 |
| ·主要试剂的配制 | 第56-58页 |
| 3 主要仪器 | 第58页 |
| 实验方法 | 第58-76页 |
| 1 细胞培养的准备 | 第58页 |
| 2 HeLa细胞培养 | 第58-60页 |
| ·细胞复苏及培养 | 第58页 |
| ·台盼蓝测定细胞活力 | 第58-59页 |
| ·细胞的消化及传代 | 第59页 |
| ·细胞的冻存 | 第59-60页 |
| 3 FAM标记的MACC1 siRNA的设计 | 第60-61页 |
| ·MACC1 siRNA序列设计原则 | 第60页 |
| ·常规化学合成MACC1特异的siRNA序列 | 第60-61页 |
| 4 细胞的转染和分组 | 第61-63页 |
| ·细胞计数 | 第61页 |
| ·细胞铺板 | 第61页 |
| ·SiRNA-Lipofectamine 2000转染混合液的配制 | 第61页 |
| ·转染 | 第61-63页 |
| ·转染细胞的分组 | 第63页 |
| 5 细胞骨架的免疫荧光染色 | 第63-64页 |
| ·细胞爬片 | 第63页 |
| ·细胞骨架染色步骤 | 第63-64页 |
| 6 RT-PCR检测 | 第64-66页 |
| ·提取细胞总RNA | 第64页 |
| ·反转录cDNA第一链合成 | 第64-65页 |
| ·聚合酶链反应(PCR) | 第65-66页 |
| ·引物的设计合成 | 第65页 |
| ·PCR实验步骤 | 第65-66页 |
| ·实验结果分析 | 第66页 |
| 7 Western blot | 第66-71页 |
| ·蛋白样品的提取 | 第66-67页 |
| ·BCA法蛋白浓度的测定 | 第67-68页 |
| ·蛋白质的变性 | 第68页 |
| ·蛋白印迹步骤 | 第68-69页 |
| ·转膜 | 第69-70页 |
| ·封闭 | 第70页 |
| ·一抗的孵育 | 第70页 |
| ·二抗的孵育 | 第70页 |
| ·ECL、显影及曝光 | 第70-71页 |
| ·图像采集和分析 | 第71页 |
| 8 Transwell小室迁移实验 | 第71-72页 |
| ·原理 | 第71页 |
| ·制备细胞悬液 | 第71页 |
| ·接种细胞 | 第71页 |
| ·固定细胞 | 第71-72页 |
| ·细胞计数 | 第72页 |
| 9 MTT实验 | 第72-73页 |
| ·原理 | 第72页 |
| ·MTT溶液的配制方法和注意事项 | 第72-73页 |
| ·实验步骤 | 第73页 |
| 10 Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡 | 第73-74页 |
| ·原理 | 第73-74页 |
| ·操作步骤 | 第74页 |
| ·操作注意事项 | 第74页 |
| 11 流式细胞术PI单染检测细胞周期 | 第74-76页 |
| ·原理 | 第74-75页 |
| ·操作步骤 | 第75页 |
| ·操作注意事项 | 第75-76页 |
| 12 统计学分析 | 第76页 |
| 结果 | 第76-85页 |
| 1 MACC1 siRNA的转染效果 | 第76-78页 |
| 2 MACC1基因抑制后对HeLa细胞骨架的影响 | 第78-79页 |
| 3 RT-PCR检测MACC1 mRNA表达水平 | 第79-81页 |
| ·RT-PCR产物的扩增曲线和溶解曲线 | 第79-80页 |
| ·MACC1 mRNA的表达 | 第80-81页 |
| 4 Westernblot检测MACC1蛋白表达水平 | 第81页 |
| 5 Transwell小室迁移实验结果 | 第81-83页 |
| 6 MTT法结果 | 第83-84页 |
| 7 MACC1基因抑制对HeLa细胞凋亡的影响 | 第84-85页 |
| 8 MACC1基因抑制对HeLa细胞周期的影响 | 第85页 |
| 讨论 | 第85-87页 |
| 小结 | 第87-88页 |
| 全文结论 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-97页 |
| 综述一：MACC1与肿瘤的研究进展 | 第97-108页 |
| 1 MACC1基因的结构及功能 | 第97-99页 |
| 2 C-MET的结构及功能 | 第99页 |
| 3 HGF的结构及功能 | 第99-100页 |
| 4 MACC1与c-MET/HGF | 第100-101页 |
| 5 MACC1在正常组织及癌组织中的表达 | 第101-102页 |
| 6 问题与展望 | 第102-104页 |
| 参考文献 | 第104-108页 |
| 综述二：MACC1与妇科肿瘤的研究进展 | 第108-115页 |
| 1 MACC1基因的结构及功能 | 第108-109页 |
| 2 MACC1与HGF/c-Met | 第109页 |
| 3 MACC1与妇科肿瘤 | 第109-112页 |
| ·MACC1与宫颈癌 | 第109-110页 |
| ·MACC1与卵巢癌 | 第110-111页 |
| ·MACC1与子宫内膜癌 | 第111-112页 |
| ·MACC1与其他的妇科肿瘤 | 第112页 |
| 4 问题与展望 | 第112-113页 |
| 参考文献 | 第113-115页 |
| 在学期间的研究成果 | 第115-116页 |
| 附：英文缩写词索引表 | 第116-118页 |
| 致谢 | 第118页 |
