| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-12页 |
| 主要中英文缩写 | 第12-16页 |
| 第1章 文献综述 | 第16-38页 |
| ·氮营养研究的重要性 | 第16-17页 |
| ·高等植物N 营养研究进展 | 第17-27页 |
| ·N 素的生理功能 | 第17-18页 |
| ·N 素的营养形态 | 第18页 |
| ·N 素的吸收 | 第18-23页 |
| ·N 素的同化 | 第23-27页 |
| ·谷氨酰胺合成酶研究进展 | 第27-33页 |
| ·谷氨酰胺合成酶分类 | 第27页 |
| ·高等植物中谷氨酰胺合成酶的亚细胞定位、功能性质及活性分布 | 第27-28页 |
| ·高等植物谷氨酰胺合成酶的编码基因及表达调控特征 | 第28-30页 |
| ·谷氨酰胺合成酶与植物N 素利用效率 | 第30-33页 |
| ·甜瓜与N 素营养 | 第33-35页 |
| ·N 素对甜瓜产量及品质的影响 | 第33-34页 |
| ·甜瓜N 营养生理 | 第34-35页 |
| ·存在的问题 | 第35页 |
| ·目的意义及研究内容 | 第35-36页 |
| ·技术路线 | 第36-38页 |
| 第2章 甜瓜胞质型谷氨酰胺合成酶基因的克隆 | 第38-66页 |
| ·材料与方法 | 第40-54页 |
| ·实验材料 | 第40-41页 |
| ·仪器设备 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-54页 |
| ·结果 | 第54-64页 |
| ·M-GS1 基因全长cDNA 序列的获得 | 第54-57页 |
| ·M-GS1 基因的生物信息学分析 | 第57-64页 |
| ·讨论 | 第64-66页 |
| 第3章 甜瓜谷氨酰胺合成酶基因的基因组拷贝数分析 | 第66-74页 |
| ·材料与试剂 | 第66-68页 |
| ·Southern blot 相关材料及试剂 | 第66-67页 |
| ·其它材料与试剂 | 第67-68页 |
| ·试验方法 | 第68-71页 |
| ·甜瓜基因组DNA 抽提 | 第68页 |
| ·基因组DNA 的消化及电泳 | 第68-69页 |
| ·转膜、固定 | 第69页 |
| ·探针制备 | 第69-70页 |
| ·杂交 | 第70页 |
| ·洗膜 | 第70-71页 |
| ·检测 | 第71页 |
| ·结果与分析 | 第71-74页 |
| 第4章 甜瓜谷氨酰胺合成酶基因表达产物亚细胞定位 | 第74-85页 |
| ·材料与方法 | 第75-80页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第75页 |
| ·质粒、菌株和引物 | 第75-76页 |
| ·构建植物重组表达质粒 | 第76-77页 |
| ·重组植物表达质粒的扩增、收集和纯化 | 第77页 |
| ·待转化洋葱内表皮的制备 | 第77-78页 |
| ·重组植物表达质粒转化洋葱表皮细胞 | 第78-79页 |
| ·亚细胞定位 | 第79-80页 |
| ·结果 | 第80-83页 |
| ·讨论 | 第83-85页 |
| 第5章 甜瓜谷氨酰胺合成酶基因的原核表达及产物GS 酶活相关分析 | 第85-99页 |
| ·实验材料 | 第85-86页 |
| ·质粒和菌株 | 第85-86页 |
| ·试剂 | 第86页 |
| ·实验方法 | 第86-90页 |
| ·蛋白质样品SDS-PAGE 分析 | 第86页 |
| ·构建重组原核表达质粒 | 第86-89页 |
| ·转化表达菌、基因诱导表达及表达产物抽提 | 第89页 |
| ·表达产物纯化 | 第89-90页 |
| ·纯化物谷氨酰胺合成酶活性测定 | 第90页 |
| ·结果 | 第90-96页 |
| ·甜瓜谷氨酰胺合成酶基因cDNA 在大肠杆菌中的表达 | 第90-94页 |
| ·原核表达纯化产物的谷氨酰胺合成酶催化特性 | 第94-96页 |
| ·讨论 | 第96-98页 |
| ·小结 | 第98-99页 |
| 第6章 不同形态N 营养对甜瓜谷氨酰胺合成酶基因表达的调控 | 第99-115页 |
| ·材料与方法 | 第99-105页 |
| ·试剂 | 第99页 |
| ·仪器 | 第99-100页 |
| ·植物材料 | 第100页 |
| ·植物材料培养、不同形态N 素营养施养处理及取样 | 第100-101页 |
| ·实时（Real-time）荧光定量PCR 表达分析 | 第101-105页 |
| ·结果 | 第105-110页 |
| ·不同形态N 营养处理对M-GS2 表达的影响 | 第105-108页 |
| ·不同形态N 营养处理对M-GS1 表达的影响 | 第108-110页 |
| ·讨论 | 第110-114页 |
| ·不同形态N 营养处理对M-GS2 表达的调控 | 第111-113页 |
| ·不同形态N 营养处理对M-GS1 表达的调控 | 第113-114页 |
| ·小结 | 第114-115页 |
| 第7章 甜瓜谷氨酰胺合成酶基因M-GS1 在拟南芥中的超量表达 | 第115-134页 |
| ·材料与试剂 | 第115-117页 |
| ·植物材料 | 第115页 |
| ·栽培基质 | 第115-116页 |
| ·抗性筛选剂 | 第116页 |
| ·MS 固体培养基 | 第116页 |
| ·拟南芥转化缓冲液 | 第116页 |
| ·菌株与质粒 | 第116-117页 |
| ·实验方法 | 第117-127页 |
| ·拟南芥培养与转化 | 第117-123页 |
| ·转基因后拟南芥PCR 分析 | 第123-126页 |
| ·拟南芥GS 酶的活性检测 | 第126页 |
| ·转基因拟南芥在不同N 素水平下的培养及生长生化分析 | 第126-127页 |
| ·结果 | 第127-132页 |
| ·转M-GS1 基因拟南芥抗除草剂筛选 | 第128页 |
| ·转M-GS1 基因拟南芥的分子检测 | 第128-129页 |
| ·转M-GS1 基因对拟南芥生化及生长指标的影响 | 第129-132页 |
| ·讨论 | 第132-133页 |
| ·小结 | 第133-134页 |
| 第8章 总结与展望 | 第134-137页 |
| ·研究总结 | 第134-135页 |
| ·创新之处 | 第135-136页 |
| ·展望 | 第136-137页 |
| 参考文献 | 第137-149页 |
| 攻读博士学位期间完成的科研论文 | 第149-150页 |
| 攻读博士学位期间参与的科研项目 | 第150-151页 |
| 致谢 | 第151-155页 |
