| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-10页 |
| 1 前言 | 第10-19页 |
| ·油菜 | 第10页 |
| ·油菜黑胫病 | 第10-13页 |
| ·油菜黑胫病的发生 | 第11页 |
| ·油菜黑胫病的症状 | 第11-12页 |
| ·油菜黑胫病的发病规律 | 第12页 |
| ·油菜黑胫病害的防治 | 第12-13页 |
| ·油菜黑胫病病原菌 | 第13-15页 |
| ·油菜黑胫病病原菌 | 第13页 |
| ·油菜黑胫病病原菌的入侵途径 | 第13-14页 |
| ·油菜黑胫病病原菌的入侵风险 | 第14页 |
| ·黑胫病病原菌的致病物质 | 第14-15页 |
| ·植物防御病原菌感染机制 | 第15-16页 |
| ·巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)真核表达系统 | 第16-17页 |
| ·研究意义 | 第17-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-38页 |
| ·实验材料 | 第19-25页 |
| ·油菜种子来源 | 第19页 |
| ·菌种来源 | 第19页 |
| ·质粒来源 | 第19-20页 |
| ·引物 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20-21页 |
| ·主要仪器设备 | 第21-22页 |
| ·培养基 | 第22-23页 |
| ·主要溶液 | 第23-25页 |
| ·方法 | 第25-38页 |
| ·黑胫病病原菌NM-1孢子悬浮液的制备 | 第25页 |
| ·甘蓝型油菜青杂5号的培养 | 第25页 |
| ·黑胫病病原菌NM-1接种甘蓝型油菜青杂5号叶片 | 第25-26页 |
| ·RNA的提取和检测 | 第26页 |
| ·反转录合成cDNA第一条链 | 第26页 |
| ·甘蓝型油菜pgip9、pgip5 CDS的克隆 | 第26-27页 |
| ·pgip9、pgip15 PCR产物回收纯化 | 第27-28页 |
| ·对胶回收产物进行加A反应 | 第28页 |
| ·构建克隆载体pMD-19-T-pgip9/pgip15 | 第28页 |
| ·感受态细胞E.coli DH5α的制备 | 第28-29页 |
| ·热激法转化感受态细胞 E.coli DH5α | 第29页 |
| ·菌液PCR筛选阳性克隆 | 第29-30页 |
| ·pgip9、pgip15测序序列分析及其蛋白结构分析和预测 | 第30页 |
| ·pMD-19-T-pgip9/15质粒的提取 | 第30-31页 |
| ·构建表达载体pPICZαA-pgip9、pPICZαA-pgip15 | 第31-32页 |
| ·重组质粒的转化酵母菌Pichia.Pastoris PMAD16 | 第32-33页 |
| ·Pichia.Pastoris PMAD16感受态细胞的制备 | 第33页 |
| ·重组质粒转化Pichia.Pastoris PMAD16 | 第33页 |
| ·阳性转化子pPICZαA-pgip9、pPICZαA-pgip15的筛选鉴定 | 第33-34页 |
| ·目的蛋白的诱导表达与检测 | 第34页 |
| ·Western blot检测 | 第34-35页 |
| ·融合蛋白PGIP9、PGIP15活性的测定 | 第35-38页 |
| 3 实验结果与讨论 | 第38-62页 |
| ·青杂5号油菜叶片RNA的提取及检测 | 第38页 |
| ·pgip9、pgip15PCR扩增 | 第38-39页 |
| ·甘蓝型油菜pgip9、pgip15测序结果分析 | 第39页 |
| ·甘蓝型油菜PGIP9蛋白结构的分析与预测 | 第39-46页 |
| ·PGIP9蛋白一级结构的分析 | 第39-43页 |
| ·青杂5号PGIP9蛋白信号肽的分析 | 第43-44页 |
| ·青杂5号PGIP9蛋白磷酸化位点的预测 | 第44页 |
| ·青杂5号PGIP9蛋白N—糖基化位点的预测 | 第44-45页 |
| ·青杂5号PGIP9蛋白亲水性和疏水性的预测 | 第45-46页 |
| ·甘蓝型油菜PGIP15蛋白结构的分析与预测 | 第46-52页 |
| ·青杂5号PGIP15蛋白一级结构分析 | 第46-49页 |
| ·青杂5号PGIP15蛋白的信号肽分析 | 第49-50页 |
| ·青杂5号PGIP15蛋白磷酸化位点的预测 | 第50页 |
| ·青杂5号PGIP15蛋白N—糖基化位点的预测 | 第50-51页 |
| ·青杂5号PGIP15蛋白亲水性和疏水性的预测 | 第51-52页 |
| ·构建表达载体pPICZαA-pgip9、pPICZαA-pgip并转化E.coli DH5α | 第52-54页 |
| ·制备线性化重组质粒转化Pichia.Pastoris PMAD16 | 第54-56页 |
| ·重组蛋白pPICZαA-PGIP9/15的诱导表达 | 第56-57页 |
| ·Western blot检测融合蛋白PGIP9、PGIP15 | 第57页 |
| ·融合蛋白PGIP9、PGIP15活性的测定 | 第57-60页 |
| ·牛血清蛋白BSA标准曲线的绘制 | 第57-58页 |
| ·融合蛋白PGIP9、PGIP15蛋白浓度测定 | 第58页 |
| ·PGIP9、PGIP15蛋白活性的测定 | 第58-60页 |
| ·讨论 | 第60-62页 |
| 4 全文总结与展望 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 附录1 pgip9、pgip15测序核苷酸序列 | 第68-69页 |
| 附录2 英文缩写表 | 第69-70页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
