| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略表 | 第12-18页 |
| 第一章 绪论 | 第18-26页 |
| ·天然抗肿瘤药物概述 | 第18-19页 |
| ·五环三萜类衍生物的结构类型 | 第19-22页 |
| ·齐墩果烷型 | 第19-20页 |
| ·乌苏烷型 | 第20页 |
| ·羽扇豆烷型 | 第20-21页 |
| ·木栓烷型 | 第21-22页 |
| ·五环三萜类衍生物的研究现状 | 第22-23页 |
| ·五环三萜类化合物抗肿瘤作用机制的研究进展 | 第23-24页 |
| ·诱导细胞凋亡 | 第23页 |
| ·阻遏细胞周期 | 第23页 |
| ·抗肿瘤细胞侵袭 | 第23-24页 |
| ·Akt1 与肿瘤的研究现状 | 第24页 |
| ·研究内容及目的意义 | 第24-26页 |
| 第二章 齐墩果酸衍生物体外抗肿瘤实验 | 第26-40页 |
| ·引言 | 第26页 |
| ·材料、试剂和仪器 | 第26-27页 |
| ·细胞株 | 第26页 |
| ·材料 | 第26页 |
| ·试剂 | 第26-27页 |
| ·仪器 | 第27页 |
| ·实验方法 | 第27-30页 |
| ·样品的配制 | 第27-28页 |
| ·细胞培养 | 第28页 |
| ·化合物 4、5 对 K562 细胞毒作用 | 第28页 |
| ·Hoechst 33342 荧光染色 | 第28页 |
| ·流式细胞术分析化合物 4、5 对 K562 细胞周期的影响 | 第28-29页 |
| ·提取细胞总蛋白 | 第29页 |
| ·细胞总蛋白定量（BCA 蛋白浓度测定试剂盒） | 第29页 |
| ·Western Blot 检测方法 | 第29-30页 |
| ·IN Cell Analyzor 分析方法 | 第30页 |
| ·实验结果 | 第30-37页 |
| ·化合物 4、5 对 K562 细胞毒作用 | 第30-31页 |
| ·Hoechst 33342 荧光染色结果 | 第31-32页 |
| ·流式细胞术检测细胞周期实验结果 | 第32-33页 |
| ·蛋白定量结果分析 | 第33-34页 |
| ·Western Blot 实验结果 | 第34-35页 |
| ·In cell analyzer | 第35-37页 |
| ·讨论 | 第37-40页 |
| 第三章 过表达 Akt1 细胞株 K562、Bel-7404 细胞的构建及鉴定 | 第40-58页 |
| ·引言 | 第40-41页 |
| ·实验材料、试剂和仪器 | 第41-42页 |
| ·实验材料 | 第41页 |
| ·实验试剂 | 第41-42页 |
| ·实验仪器 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-49页 |
| ·引物设计 | 第42页 |
| ·模板制备 | 第42-43页 |
| ·RNA 反转录成 cDNA 制备 | 第43页 |
| ·目的片段 Akt1 的 PCR 扩增 | 第43-44页 |
| ·PCR 产物回收 | 第44-45页 |
| ·质粒 pLJM1 的提取 | 第45页 |
| ·双酶切 | 第45-46页 |
| ·酶切产物回收 | 第46页 |
| ·T_4链接酶连接 | 第46页 |
| ·转化 | 第46-47页 |
| ·质粒 PCR 鉴定 | 第47页 |
| ·双酶切鉴定 | 第47-48页 |
| ·测序鉴定 | 第48页 |
| ·pLJM1、pLJM1/Akt1、psPAX2、pMD2.G 天根试剂盒质粒大抽 | 第48页 |
| ·pLJM1、pLJM1/Akt1、psPAX2、pMD2.G 质粒浓度浓缩 | 第48-49页 |
| ·过表达 Akt1 的 K562、Bel-7404 稳定细胞株的构建及筛选 | 第49-50页 |
| ·293T、K562、Bel-7404 细胞培养 | 第49页 |
| ·慢病毒包装 | 第49页 |
| ·病毒包装成功与否鉴定 | 第49-50页 |
| ·病毒侵染及稳定株的筛选 | 第50页 |
| ·Western blot 检测方法 | 第50页 |
| ·化合物 4、5 对过表达 Akt1 的 Bel-7404 和 K562 细胞细胞毒作用 | 第50页 |
| ·结果 | 第50-56页 |
| ·模板制备 | 第50-51页 |
| ·目的产物扩增 | 第51页 |
| ·目的片段 Akt1 和载体 pLJM1 双酶切 | 第51-52页 |
| ·重组质粒 pLJM1/Akt1 的质粒 PCR 鉴定 | 第52页 |
| ·重组质粒 pLJM1/Akt1 的酶切鉴定结果 | 第52-53页 |
| ·测序鉴定结果 | 第53-54页 |
| ·pLJM1 与包装质粒共转染 293T 细胞 | 第54-55页 |
| ·Western blot 检测包装的慢病毒 | 第55页 |
| ·Western blot 检测目的蛋白 Akt1 的表达 | 第55-56页 |
| ·化合物 4、5 对过表达 Akt1 的 K562 细胞细胞毒作用 | 第56页 |
| ·讨论 | 第56-58页 |
| 第四章 结论与展望 | 第58-60页 |
| ·结论 | 第58页 |
| ·创新点 | 第58-59页 |
| ·展望 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-68页 |
| 附录 | 第68-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
