| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 文献综述 | 第12-19页 |
| 1 草莓镶脉病毒概况 | 第12-13页 |
| ·草莓镶脉病毒的危害及分布 | 第12页 |
| ·草莓镶脉病毒的基因组结构 | 第12页 |
| ·草莓镶脉病毒编码的各蛋白及功能 | 第12-13页 |
| 2 病毒与寄主的互作 | 第13-19页 |
| ·病毒编码的致病蛋白—症状决定子 | 第13-14页 |
| ·症状决定子研究现状 | 第14-17页 |
| ·植物寄主对病毒的防御反应 | 第17-19页 |
| 引言 | 第19-20页 |
| 材料与方法 | 第20-39页 |
| 1 试验材料 | 第20-21页 |
| ·病样来源 | 第20页 |
| ·植物材料 | 第20页 |
| ·菌种和载体 | 第20页 |
| ·酶和化学试剂 | 第20页 |
| ·常用缓冲溶液和培养基 | 第20页 |
| ·抗生素及生长素 | 第20页 |
| ·仪器设备 | 第20-21页 |
| 2 试验方法 | 第21-39页 |
| ·总 DNA 的提取 | 第21页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第21-22页 |
| ·RNATrizol 提取方法 | 第21-22页 |
| ·RNA 试剂盒提取方法 | 第22页 |
| ·cDNA 的合成 | 第22-23页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第23-24页 |
| ·CaCl2法制备感受态细胞 | 第23页 |
| ·水洗法制备农杆菌感受态细胞 | 第23-24页 |
| ·PCR 技术 | 第24-25页 |
| ·PCR 产物的克隆及转化 | 第25-26页 |
| ·PCR 产物回收和纯化 | 第25页 |
| ·PCR 胶回收产物的连接 | 第25页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌 | 第25-26页 |
| ·连接产物转化农杆菌 | 第26页 |
| ·阳性克隆的 PCR 鉴定 | 第26-27页 |
| ·质粒提取 | 第27页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第27-28页 |
| ·植物表达载体的构建策略 | 第28-29页 |
| ·转基因植物表达载体的构建策略 | 第28-29页 |
| ·瞬时表达病毒载体的构建策略 | 第29页 |
| ·植物表达载体的构建过程 | 第29-32页 |
| ·SVBV 美国分离物各基因的引物设计 | 第29-31页 |
| ·SVBV 各基因的克隆 | 第31-32页 |
| ·二元植物表达载体的构建 | 第32页 |
| ·病毒载体的构建 | 第32页 |
| ·农杆菌转化 | 第32页 |
| ·瞬时浸润本氏烟 | 第32-34页 |
| ·验证 SVBV 致病性相关蛋白 | 第32-33页 |
| ·验证 SVBV 各蛋白互作 | 第33页 |
| ·验证 P6 与植物抗病性相关基因 06G 的互作 | 第33-34页 |
| ·瞬时浸润本氏烟的检测 | 第34-38页 |
| ·SVBV 致病性相关蛋白的 RT-PCR 检测 | 第34-35页 |
| ·SVBV 致病性相关蛋白的 Real-time PCR 检测 | 第35-36页 |
| ·植物抗性基因 06G 的 Real-time PCR 检测 | 第36页 |
| ·瞬时浸润本氏烟的 ELISA 检测 | 第36-37页 |
| ·P6 蛋白的 Western Blot 分析 | 第37-38页 |
| ·稳定表达烟草的获得及其检测 | 第38-39页 |
| ·烟草转基因方法 | 第38页 |
| ·转基因烟草的症状观察及检测 | 第38-39页 |
| 结果与分析 | 第39-50页 |
| 1 SVBV 美国分离物各基因的克隆与载体构建 | 第39-41页 |
| ·SVBV 美国分离物各基因克隆 | 第39页 |
| ·SVBV 美国分离物各基因 pGR106 载体构建 | 第39-41页 |
| ·P6 基因的 pCAM2300 载体构建 | 第41页 |
| 2 SVBV 美国分离物各基因表达载体的瞬时浸润 | 第41-46页 |
| ·症状表型 | 第41-43页 |
| ·相关基因的 RT-PCR 检测 | 第43-45页 |
| ·P6 蛋白积累量的检测 | 第45-46页 |
| 3 P1、P2 和 P4 分别与 P6 基因共浸润本氏烟 | 第46页 |
| 4 pCAM2300 空载体和 pCAM-P6-US 转化本氏烟 | 第46-49页 |
| 5 P6 与植物抗病性相关基因 06G 的互作 | 第49-50页 |
| 讨论 | 第50-54页 |
| 1 SVBV 美国分离物各基因单独接种本氏烟的症状表型 | 第50-51页 |
| 2 SVBV 美国分离物各基因混合接种本氏烟的症状表型 | 第51-52页 |
| 3 P6 转基因本氏烟未出现表型差异 | 第52页 |
| 4 SVBV 各蛋白与植物 06G 基因的互作 | 第52-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 附录 A：常用缓冲液及培养基配制方法 | 第61-65页 |
| 附录 B：常用的抗生素和激素及使用浓度 | 第65-66页 |
| 附录 C：常用化学试剂、分子生物学试剂及仪器 | 第66-68页 |
| 附录 D：本文所用的重要缩写词及中文对照 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 个人简介及在读期间发表的学术论文 | 第70页 |
