| 中文摘要 | 第1-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 1 引言 | 第15-28页 |
| ·下丘脑-垂体-卵巢轴研究进展 | 第16-17页 |
| ·雌激素及雌激素受体研究进展 | 第17-21页 |
| ·雌激素 | 第17页 |
| ·雌激素的作用机制 | 第17-19页 |
| ·雌激素受体的发现 | 第19页 |
| ·雌激素受体的结构 | 第19-21页 |
| ·雌激素受体的分布 | 第21-22页 |
| ·人生殖系统中雌激素受体分布 | 第21页 |
| ·鼠生殖系统中雌激素受体分布 | 第21-22页 |
| ·牛生殖系统中雌激素受体分布 | 第22页 |
| ·绵羊和山羊生殖系统中雌激素受体分布 | 第22页 |
| ·雌激素受体的功能 | 第22-24页 |
| ·雌激素受体在卵巢中的定位与功能 | 第22-23页 |
| ·雌激素受体基因结构与功能 | 第23-24页 |
| ·雌激素受体的检测方法 | 第24-26页 |
| ·免疫组化法 | 第24-25页 |
| ·Western Blot 法 | 第25页 |
| ·原位杂交技术 | 第25-26页 |
| ·荧光定量 PCR 法 | 第26页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第26-28页 |
| 2 材料与方法 | 第28-41页 |
| ·材料 | 第28-31页 |
| ·实验动物 | 第28页 |
| ·实验质粒载体和菌株 | 第28页 |
| ·主要试剂与药品 | 第28页 |
| ·主要仪器 | 第28-29页 |
| ·实验地点 | 第29页 |
| ·主要溶液试剂的配制 | 第29-30页 |
| ·试验前器材的准备 | 第30-31页 |
| ·主要生物学数据库和生物学软件 | 第31页 |
| ·方法 | 第31-41页 |
| ·济宁青山羊和沂蒙黑山羊 ERα和 ERβ全基因的克隆 | 第31-34页 |
| ·组织总 RNA 的制备 | 第31页 |
| ·RNA 质量的鉴定 | 第31-32页 |
| ·RT-PCR | 第32-33页 |
| ·目的基因的获得 | 第33页 |
| ·PCR 产物克隆、鉴定与序列分析 | 第33-34页 |
| ·济宁青山羊和沂蒙黑山羊 ERα和 ERβ基因的同源性分析 | 第34页 |
| ·济宁青山羊和沂蒙黑山羊 ERα和 ERβ蛋白功能结构域预测分析 | 第34页 |
| ·山羊 ERα和 ERβ基因的原核表达及多克隆抗体的制备 | 第34-39页 |
| ·pET32a-ERα和 pET32a-ERβ重组质粒的构建 | 第34-35页 |
| ·连接产物的转化 | 第35页 |
| ·His-ERα和 His-ERβ融合蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第35页 |
| ·原核表达条件的优化 | 第35-37页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第37-38页 |
| ·Western-blot 检测纯化后的蛋白 | 第38页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第38页 |
| ·多克隆抗体的效价及特异性检测 | 第38-39页 |
| ·山羊 ERα和 ERβ重组蛋白多克隆抗体介导的免疫组化方法的建立 | 第39-41页 |
| ·常规石蜡切片的制备 | 第39-40页 |
| ·HE 法染色 | 第40页 |
| ·免疫组化方法的建立 | 第40-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-56页 |
| ·济宁青山羊和沂蒙黑山羊 ERα和 ERβ全基因的克隆 | 第41-50页 |
| ·组织总 RNA 的制备 | 第41页 |
| ·RT-PCR 产物电泳分析 | 第41-43页 |
| ·山羊 ERα全基因的克隆 | 第41-42页 |
| ·山羊 ERβ全基因的克隆 | 第42-43页 |
| ·ERα和 ERβ基因重组克隆载体的鉴定及序列的测序鉴定 | 第43页 |
| ·山羊 ERα基因重组克隆载体的鉴定 | 第43页 |
| ·山羊 ERβ基因重组克隆载体的鉴定 | 第43页 |
| ·济宁青山羊和沂蒙黑山羊 ERα和 ERβ基因的同源性分析 | 第43-45页 |
| ·ERα基因的同源性分析 | 第43-44页 |
| ·ERβ基因的同源性分析 | 第44-45页 |
| ·ERα和 ERβ基因编码氨基酸的主要功能结构域分析 | 第45-50页 |
| ·山羊 ERα和 ERβ基因编码氨基酸的主要抗原域预测 | 第45-46页 |
| ·济宁青山羊和沂蒙黑山羊 ERα和 ERβ蛋白结构预测与分析 | 第46-50页 |
| ·山羊 ERα和 ERβ基因的原核表达及多克隆抗体的制备 | 第50-55页 |
| ·重组表达载体的鉴定 | 第50-51页 |
| ·His-ERα和 His-ERβ融合蛋白的表达与纯化 | 第51-53页 |
| ·表达菌体的活化 | 第51-52页 |
| ·ERα和 ERβ基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第52页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第52-53页 |
| ·His-ERα和 His-ERβ融合蛋白的 Western blot 分析 | 第53-54页 |
| ·多克隆抗体的效价检测及特异性分析 | 第54-55页 |
| ·山羊卵巢和子宫中 ERα和 ERβ的定位检测 | 第55-56页 |
| ·山羊卵巢和子宫组织中 ERα定位检测 | 第55页 |
| ·山羊卵巢和子宫组织中 ERβ定位检测 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-63页 |
| ·山羊雌激素受体基因序列及结构对功能的影响 | 第56-58页 |
| ·原核表达条件对制备抗体的影响 | 第58-60页 |
| ·原核表达系统表达 ER 基因条件及优势 | 第58-59页 |
| ·原核条件的优化 | 第59-60页 |
| ·包涵体蛋白的纯化与免疫原性鉴定 | 第60页 |
| ·山羊卵巢和子宫组织中 ERα和 ERβ的定位 | 第60-63页 |
| 5 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-73页 |
| 附图 | 第73-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 作者简介及攻读学位期间发表论文 | 第76页 |
