致谢 | 第1-6页 |
摘要 | 第6-7页 |
ABSTRACT | 第7-11页 |
引言 | 第11-12页 |
第一章 文献综述 | 第12-35页 |
1 灰霉病与灰霉病菌 | 第12-17页 |
·灰霉病生物学概况 | 第12-13页 |
·灰霉病害发生规律 | 第13-14页 |
·灰霉病害防治 | 第14-17页 |
2 双组份组氨酸信号途径 | 第17-27页 |
·原核生物的两组分系统:His-Asp | 第18-20页 |
·真核生物的两组分系统:His-Asp-His-Asp | 第20-27页 |
3 蛋白磷酸酶研究进展 | 第27-33页 |
·PP2C磷酸酶的结构与功能 | 第28-32页 |
·酪氨酸磷酸酶 | 第32-33页 |
4 本研究的目的和内容 | 第33-35页 |
第二章 材料与方法 | 第35-59页 |
1 试验材料 | 第35-36页 |
·菌株和质粒 | 第35页 |
·供试植物 | 第35-36页 |
2 试验方法 | 第36-59页 |
·灰霉菌种的保存与培养 | 第36页 |
·灰霉基因组DNA的提取 | 第36-37页 |
·PCR技术 | 第37-38页 |
·DNA的琼脂糖电泳 | 第38页 |
·PCR产物纯化 | 第38-39页 |
·DNA克隆技术 | 第39-40页 |
·E.Coli DH5α感受态细胞的制备及转化 | 第40-41页 |
·重组质粒的鉴定与提取 | 第41-42页 |
·质粒酶切 | 第42-43页 |
·农杆菌电击法转化 | 第43-44页 |
·灰霉病菌T-DNA转化 | 第44页 |
·灰霉的原生质体转化 | 第44-45页 |
·灰霉基因组DNA Southern blot分析 | 第45-50页 |
·RNA提取与表达量分析 | 第50-51页 |
·Western blot分析 | 第51-55页 |
·酵母双杂交试验 | 第55-56页 |
·菌丝甘油量测定 | 第56页 |
·生长速率测定 | 第56页 |
·产孢量分析 | 第56-57页 |
·灰霉病菌抗胁迫压力的测定 | 第57页 |
·灰霉病菌致病性分析 | 第57-59页 |
第三章 结果与分析 | 第59-109页 |
1 灰霉病菌中2C型丝氨酸/苏氨酸磷酸酶(PP2Cs)的功能研究 | 第59-82页 |
·灰霉5个PTC的克隆和功能分析 | 第59-60页 |
·5个PTC基因敲除载体的构建 | 第60-62页 |
·灰霉PTC敲除转化子的获得 | 第62-63页 |
·ΔBcPtc1,ΔBcPtc3突变体的互补 | 第63-64页 |
·突变体表型分析 | 第64-79页 |
·BcNbp2的功能鉴定 | 第79-80页 |
·小结与讨论 | 第80-82页 |
2 灰霉病菌中酪氨酸磷酸酶(PTPs)的功能研究 | 第82-98页 |
·BcPTPA及BcPTPB基因敲除载体的构建 | 第82-83页 |
·BcPTPA及BcPTPB敲除突变体的获得 | 第83-84页 |
·ΔBcPtpB突变体的互补 | 第84页 |
·突变体表型分析 | 第84-96页 |
·小结与讨论 | 第96-98页 |
3 灰霉BcSkn7的功能分析 | 第98-109页 |
·BcSKN7的分析 | 第98页 |
·BcSKN7回补酵母突变体 | 第98-100页 |
·BcSKN7基因的克降与敲除 | 第100-101页 |
·ΔBcSkn7-1突变体的互补 | 第101页 |
·突变体表型分析 | 第101-108页 |
·小结与讨论 | 第108-109页 |
第四章 全文总结与展望 | 第109-119页 |
1 全文总结 | 第109-116页 |
·BcPtc及BcPtp与菌体生长发育有关 | 第109-110页 |
·BcPtc及BcPtp参与渗透、氧化压力敏感性调控 | 第110-111页 |
·BcPtc及BcPtp调控BcSak1及BcBmp3磷酸化 | 第111-113页 |
·BcPtc及BcPtp调控药剂敏感性 | 第113页 |
·BcPtc及BcPtp与致病性相关 | 第113-114页 |
·BcSkn7与菌体生长代谢相关 | 第114-116页 |
2 本研究创新点 | 第116-117页 |
3 后续研究展望 | 第117-119页 |
参考文献 | 第119-129页 |
附录 | 第129-146页 |
附录A:引物 | 第129-136页 |
附录B:培养基配方 | 第136-140页 |
附录C:常用试剂和试验仪器 | 第140-145页 |
附录D:个人简历和博士期间发表的学术论文 | 第145-146页 |