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灰霉病菌中2C型丝氨酸/苏氨酸磷酸酶(PTCs)及酪氨酸磷酸酶(PTPs)的功能研究

致谢第1-6页
摘要第6-7页
ABSTRACT第7-11页
引言第11-12页
第一章 文献综述第12-35页
 1 灰霉病与灰霉病菌第12-17页
   ·灰霉病生物学概况第12-13页
   ·灰霉病害发生规律第13-14页
   ·灰霉病害防治第14-17页
 2 双组份组氨酸信号途径第17-27页
   ·原核生物的两组分系统:His-Asp第18-20页
   ·真核生物的两组分系统:His-Asp-His-Asp第20-27页
 3 蛋白磷酸酶研究进展第27-33页
   ·PP2C磷酸酶的结构与功能第28-32页
   ·酪氨酸磷酸酶第32-33页
 4 本研究的目的和内容第33-35页
第二章 材料与方法第35-59页
 1 试验材料第35-36页
   ·菌株和质粒第35页
   ·供试植物第35-36页
 2 试验方法第36-59页
   ·灰霉菌种的保存与培养第36页
   ·灰霉基因组DNA的提取第36-37页
   ·PCR技术第37-38页
   ·DNA的琼脂糖电泳第38页
   ·PCR产物纯化第38-39页
   ·DNA克隆技术第39-40页
   ·E.Coli DH5α感受态细胞的制备及转化第40-41页
   ·重组质粒的鉴定与提取第41-42页
   ·质粒酶切第42-43页
   ·农杆菌电击法转化第43-44页
   ·灰霉病菌T-DNA转化第44页
   ·灰霉的原生质体转化第44-45页
   ·灰霉基因组DNA Southern blot分析第45-50页
   ·RNA提取与表达量分析第50-51页
   ·Western blot分析第51-55页
   ·酵母双杂交试验第55-56页
   ·菌丝甘油量测定第56页
   ·生长速率测定第56页
   ·产孢量分析第56-57页
   ·灰霉病菌抗胁迫压力的测定第57页
   ·灰霉病菌致病性分析第57-59页
第三章 结果与分析第59-109页
 1 灰霉病菌中2C型丝氨酸/苏氨酸磷酸酶(PP2Cs)的功能研究第59-82页
   ·灰霉5个PTC的克隆和功能分析第59-60页
   ·5个PTC基因敲除载体的构建第60-62页
   ·灰霉PTC敲除转化子的获得第62-63页
   ·ΔBcPtc1,ΔBcPtc3突变体的互补第63-64页
   ·突变体表型分析第64-79页
   ·BcNbp2的功能鉴定第79-80页
   ·小结与讨论第80-82页
 2 灰霉病菌中酪氨酸磷酸酶(PTPs)的功能研究第82-98页
   ·BcPTPA及BcPTPB基因敲除载体的构建第82-83页
   ·BcPTPA及BcPTPB敲除突变体的获得第83-84页
   ·ΔBcPtpB突变体的互补第84页
   ·突变体表型分析第84-96页
   ·小结与讨论第96-98页
 3 灰霉BcSkn7的功能分析第98-109页
   ·BcSKN7的分析第98页
   ·BcSKN7回补酵母突变体第98-100页
   ·BcSKN7基因的克降与敲除第100-101页
   ·ΔBcSkn7-1突变体的互补第101页
   ·突变体表型分析第101-108页
   ·小结与讨论第108-109页
第四章 全文总结与展望第109-119页
 1 全文总结第109-116页
   ·BcPtc及BcPtp与菌体生长发育有关第109-110页
   ·BcPtc及BcPtp参与渗透、氧化压力敏感性调控第110-111页
   ·BcPtc及BcPtp调控BcSak1及BcBmp3磷酸化第111-113页
   ·BcPtc及BcPtp调控药剂敏感性第113页
   ·BcPtc及BcPtp与致病性相关第113-114页
   ·BcSkn7与菌体生长代谢相关第114-116页
 2 本研究创新点第116-117页
 3 后续研究展望第117-119页
参考文献第119-129页
附录第129-146页
 附录A:引物第129-136页
 附录B:培养基配方第136-140页
 附录C:常用试剂和试验仪器第140-145页
 附录D:个人简历和博士期间发表的学术论文第145-146页

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