| 中文摘要 | 第1-24页 |
| ABSTRACT | 第24-33页 |
| 符号说明 | 第33-36页 |
| 绪论 | 第36-51页 |
| 一、肿瘤化学治疗 | 第36-37页 |
| 二、肿瘤基因治疗 | 第37-38页 |
| 三、抗肿瘤药物与基因共递送 | 第38-47页 |
| 1. 阳离子胶束/聚合物 | 第40-42页 |
| 2. 自组装阳离子多肽 | 第42-43页 |
| 3. 阳离子脂质体 | 第43-45页 |
| 4. 无机纳米粒 | 第45-47页 |
| 四、本课题设计思路 | 第47-51页 |
| 第一部分 新型功能材料合成与性质评价 | 第51-77页 |
| 一、实验材料 | 第51-53页 |
| 1 主要试剂 | 第51-52页 |
| 2 主要仪器 | 第52页 |
| 3 细胞培养 | 第52页 |
| 4 试剂配制 | 第52-53页 |
| 二、实验方法 | 第53-59页 |
| 1 材料合成 | 第53-57页 |
| ·DPPT的合成 | 第53-55页 |
| ·PEI-PEG的合成 | 第54页 |
| ·PPT的合成 | 第54页 |
| ·pH敏感DPPT的合成 | 第54-55页 |
| ·合成C6-SANH-PPT | 第54页 |
| ·合成DPPT | 第54-55页 |
| ·合成SPN | 第55-57页 |
| ·合成SA-PEG | 第56页 |
| ·合成SPN | 第56-57页 |
| 2 DOX含量测定方法建立 | 第57-58页 |
| ·最大吸收波长的选择 | 第57页 |
| ·不同pH值PBS中标准曲线的制备 | 第57页 |
| ·不同pH值PBS中精密度实验 | 第57页 |
| ·不同pH值PBS中方法回收率实验 | 第57-58页 |
| 3 DPPT中DOX载药量测定 | 第58页 |
| 4 pH敏感DOX释放 | 第58页 |
| 5 内吞体缓冲能力 | 第58页 |
| 6 体外细胞毒性 | 第58-59页 |
| 7 体外细胞摄取实验 | 第59页 |
| 8 统计学分析 | 第59页 |
| 三、实验结果 | 第59-75页 |
| 1 材料合成 | 第59-62页 |
| ·PPT的合成 | 第59-60页 |
| ·DPPT的合成 | 第60页 |
| ·SPN的合成 | 第60-62页 |
| 2 DOX含量测定方法建立 | 第62-67页 |
| ·检测波长的确定 | 第62-64页 |
| ·标准曲线的制备 | 第64-66页 |
| ·在pH7.4的0.1 M PBS中的标准曲线 | 第64-65页 |
| ·在pH5的0.1 M PBS中的标准曲线 | 第65-66页 |
| ·日内、日间精密度试验 | 第66-67页 |
| ·在pH7.4的0.1 M PBS中中精密度实验 | 第66页 |
| ·在pH5的0.1 M PBS中精密度实验 | 第66-67页 |
| ·方法回收率试验 | 第67页 |
| ·在pH7.4的0.1 M PBS中方法回收率实验 | 第67页 |
| ·在pH5的0.1 M PBS中方法回收率实验 | 第67页 |
| 3 DPPT中DOX载药量测定 | 第67-68页 |
| 4 pH敏感药物释放 | 第68页 |
| 5 内吞体缓冲能力 | 第68-69页 |
| 6 体外细胞毒性 | 第69-73页 |
| 7 不同pH条件下细胞摄取实验 | 第73-75页 |
| 四、讨论 | 第75-76页 |
| 五、本章小结 | 第76-77页 |
| 第二部分 多功能自组装纳米载体构建和体外药物/基因共递送 | 第77-97页 |
| 一、实验材料 | 第78-80页 |
| 1 试剂与药品 | 第78页 |
| 2 主要仪器 | 第78-79页 |
| 3 细胞 | 第79页 |
| 4 质粒 | 第79页 |
| 5 细菌培养 | 第79-80页 |
| 6 试剂配制 | 第80页 |
| 二、实验方法 | 第80-84页 |
| 1 DDN的制备 | 第80-81页 |
| 2 TDDN的制备 | 第81页 |
| 3 组装过程中影响因素的考察 | 第81页 |
| ·琼脂糖凝胶的制备及使用方法 | 第81页 |
| ·质量比(W/W)对DDN形成的影响 | 第81页 |
| ·外层SPN用量对TDDN形成的影响 | 第81页 |
| 4 理化性质考察 | 第81-82页 |
| 5 抗核酸酶能力考察 | 第82页 |
| ·DNA提取方法的选择 | 第82页 |
| ·抗核酸酶能力 | 第82页 |
| 6 血浆稳定性考察 | 第82-83页 |
| 7 细胞毒性实验 | 第83页 |
| 8 体外转染实验和基因/药物共递送 | 第83页 |
| 9 统计学分析 | 第83-84页 |
| 三、实验结果 | 第84-94页 |
| 1 DDN的制备 | 第84-85页 |
| 2 TDDN的制备 | 第85页 |
| 3 理化性质考察 | 第85-86页 |
| 4 细胞毒性实验 | 第86-87页 |
| 5 体外细胞转染实验 | 第87-88页 |
| 6 最优处方的确定 | 第88-89页 |
| 7 抗核酸酶能力考察 | 第89-91页 |
| ·DNA提取方法 | 第89-90页 |
| ·抗核酸酶能力 | 第90-91页 |
| 8 血浆稳定性考察 | 第91-92页 |
| 9 体外转染和基因/药物共递送实验 | 第92-94页 |
| 四、讨论 | 第94-96页 |
| 五、本章小结 | 第96-97页 |
| 第三部分 多功能自组装纳米载体细胞摄取和入胞机制研究 | 第97-115页 |
| 一、实验材料 | 第98-100页 |
| 1 试剂与药品 | 第98页 |
| 2 主要仪器 | 第98-99页 |
| 3 细胞 | 第99页 |
| 4 试剂配制 | 第99-100页 |
| 二、实验方法 | 第100-103页 |
| 1 细胞爬片技术 | 第100-101页 |
| ·爬片的准备 | 第100页 |
| ·细胞爬片 | 第100-101页 |
| ·细胞固定 | 第101页 |
| 2 细胞表面CD13受体表达 | 第101页 |
| 3 体外摄取实验 | 第101-102页 |
| 4 药物释放入核实验 | 第102页 |
| 5 时间依赖实验 | 第102页 |
| 6 温度影响实验 | 第102页 |
| 7 竞争抑制实验 | 第102页 |
| 8 内吞抑制实验 | 第102-103页 |
| 9 统计学分析 | 第103页 |
| 三、实验结果 | 第103-112页 |
| 1 细胞表面CD13受体表达 | 第103-104页 |
| 2 体外摄取实验 | 第104-105页 |
| 3 药物释放入核实验 | 第105-106页 |
| 4 入胞动力学实验 | 第106-107页 |
| 5 竞争抑制试验 | 第107-108页 |
| 6 内吞抑制实验 | 第108-112页 |
| 四、讨论 | 第112-113页 |
| 五、本章小结 | 第113-115页 |
| 第四部分 NGR介导多功能自组装纳米载体通过小窝内吞过程入胞 | 第115-131页 |
| 一、实验材料 | 第115-117页 |
| 1 试剂与药品 | 第115-116页 |
| 2 主要仪器 | 第116页 |
| 3 细胞 | 第116-117页 |
| 4 试剂配制 | 第117页 |
| 二、实验方法 | 第117-120页 |
| 1 HUVEC表面CAV-1表达 | 第117-118页 |
| 2 HUVEC表面CD13受体分布 | 第118页 |
| 3 CD13与CAV-1共定位实验 | 第118页 |
| 4 靶向自组装纳米载体对CD13与CAV-1共定位的影响 | 第118-119页 |
| 5 靶向自组装纳米载体与CD13的相互作用 | 第119页 |
| 6 靶向自组装纳米载体与CAV-1的相互作用 | 第119页 |
| 7 CD13酶活性对靶向自组装纳米载体入胞的影响 | 第119-120页 |
| 8 胆固醇抑制对靶向自组装纳米载体入胞的影响 | 第120页 |
| 9 胆固醇抑制对靶向自组装纳米载体与CAV相互作用的影响 | 第120页 |
| 10 统计学分析 | 第120页 |
| 三、实验结果 | 第120-128页 |
| 1 HUVEC表面CD13和CAV-1双表达 | 第120-121页 |
| 2 HUVEC表面CD13受体分布 | 第121-122页 |
| 3 CD13与CAV-1共定位实验 | 第122-124页 |
| 4 靶向自组装纳米载体对CD13与CAV-1共定位的影响 | 第124页 |
| 5 靶向自组装纳米载体与CD13的相互作用 | 第124-125页 |
| 6 靶向自组装纳米载体与CAV-1的相互作用 | 第125-126页 |
| 7 CD13酶活性对靶向自组装纳米载体入胞的影响 | 第126-127页 |
| 8 胆固醇抑制对靶向自组装纳米载体入胞的影响 | 第127页 |
| 9 胆固醇抑制对靶向自组装纳米载体与CAV相互作用的影响 | 第127-128页 |
| 四、讨论 | 第128-129页 |
| 五、本章小结 | 第129-131页 |
| 第五部分 体外模型预测多功能自组装纳米载体体内靶向递送过程 | 第131-143页 |
| 一、实验材料 | 第132-133页 |
| 1 试剂与药品 | 第132页 |
| 2 主要仪器 | 第132-133页 |
| 3 细胞 | 第133页 |
| 二、实验方法 | 第133-135页 |
| 1 荧光素钠法验证HUVEC单层形成 | 第133页 |
| 2 多功能自组装纳米载体跨HUVEC单层实验 | 第133-134页 |
| 3 靶向自组装纳米载体在HUVEC内过程 | 第134页 |
| 4 靶向自组装纳米载体在MCF-7细胞内过程 | 第134页 |
| 5 靶向自组装纳米载体对内吞途径的影响 | 第134页 |
| 6 内吞途径间相互转化 | 第134-135页 |
| 7 统计学分析 | 第135页 |
| 三、实验结果 | 第135-139页 |
| 1 荧光素钠法验证HUVEC单层形成 | 第135-136页 |
| 2 多功能自组装纳米载体跨HUVEC单层实验 | 第136-137页 |
| 3 靶向自组装纳米载体在HUVEC细胞内过程 | 第137-138页 |
| 4 靶向自组装纳米载体在MCF-7细胞内过程 | 第138-139页 |
| 四、讨论 | 第139-141页 |
| 五、本章小结 | 第141-143页 |
| 全文总结与展望 | 第143-149页 |
| 一、结论 | 第143-147页 |
| 二、创新与发现 | 第147-148页 |
| 三、展望 | 第148-149页 |
| 参考文献 | 第149-161页 |
| 致谢 | 第161-162页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第162-163页 |
| 附录Ⅰ ~1H-NMR图谱 | 第163-167页 |
| 附录Ⅱ 代表性SCI论文 | 第167-229页 |
| 附件 | 第229页 |
