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烟草抗马铃薯γ病毒(PVY)育种、抗性基因的克隆与功能分析

致谢第1-9页
摘要第9-11页
1 文献综述第11-38页
   ·马铃薯 Y 病毒病研究现状第11-15页
     ·马铃薯 Y 病毒的分子生物学研究第11-12页
     ·马铃薯 Y 病毒的株系划分第12-14页
     ·马铃薯 Y 病毒的传播第14-15页
   ·烟草马铃薯 Y 病毒病的危害与防治第15-18页
     ·烟草马铃薯 Y 病毒病的危害第15-17页
     ·烟草马铃薯 Y 病毒病的防治第17-18页
   ·烟草抗马铃薯 Y 病毒品种的选育第18-20页
     ·烟草抗马铃薯 Y 病毒种质资源的收集与研究第18页
     ·烟草抗马铃薯 Y 病毒病育种第18-20页
   ·植物抗病机制研究第20-23页
     ·植物转脂蛋白(lipid transfer protein)研究第21页
     ·RNA 干扰(RNA interference)机制第21-22页
     ·病毒翻译障碍机制第22-23页
   ·植物抗病基因的种类第23-25页
     ·植物抗病基因分类第23-25页
     ·植物自身的马铃薯 Y 病毒抗性基因第25页
   ·植物抗病基因的克隆策略第25-29页
     ·功能克隆(functional Cloning)第25-26页
     ·定位克隆(Positional cloning)第26页
     ·人工合成并克隆基因第26页
     ·转座子标记法(transposon tagging)第26-27页
     ·表型克隆(phenotype cloning)第27页
     ·mRNA 差异显示(mRNA differential display)第27-28页
     ·减法杂交(Subtractive hybridization)第28页
     ·依据序列同源性克隆基因第28页
     ·同系位候选法第28-29页
   ·抑制性消减杂交(suppression subtractive byridization,SSH)技术原理与程序第29-32页
   ·同源序列克隆的原理与程序第32-36页
     ·全长 cDNA 文库构建第33-35页
     ·RACE第35-36页
   ·本研究的目的意义第36-38页
2 烟草抗马铃薯 Y 病毒种质资源的筛选第38-51页
   ·试验材料与试验设计第38-42页
     ·试验材料第38-41页
     ·试验设计第41页
     ·调查、统计方法第41-42页
   ·结果与分析第42-48页
     ·温室接种鉴定结果第42页
     ·田间病圃鉴定结果第42-48页
   ·结论与讨论第48-51页
3 烟草马铃薯 Y 病毒主要抗源材料的抗性遗传分析第51-55页
   ·试验材料与田间试验设计第51页
     ·试验材料第51页
     ·试验设计第51页
   ·结果与分析第51-53页
   ·结论与讨论第53-55页
4 烟草抗马铃薯 Y 病毒育种第55-64页
   ·试验材料第55页
   ·试验设计与步骤第55-56页
   ·结果与分析第56-62页
     ·选择抗 PVY 杂交杂交后代材料情况第56-57页
     ·育成抗病品种情况第57-62页
   ·结论与讨论第62-64页
5 烟草 PVY 诱导的抑制性消减文库的建立及 EST 分析第64-87页
   ·试验材料第64页
     ·供试品种第64页
     ·试验材料的准备第64页
   ·取样第64页
   ·耗材试剂第64-66页
   ·仪器设备第66-67页
   ·方法第67-69页
     ·总 RNA 的提取第67页
     ·RNA 质量检测第67-69页
   ·mRNA 分离纯化第69-77页
     ·实验操作步骤第69-71页
       ·实验准备第69页
         ·操作第69页
       ·合成第一链 cDNA第69-70页
       ·合成 cDNA 第二链第70-71页
       ·实验参数第71页
       ·电泳检测第71页
     ·cDNA RsaI 酶切第71-73页
     ·接头连接第73-74页
     ·差减杂交第74-77页
   ·实验结果与分析第77-86页
     ·烟叶总 RNA 的提取结果第77-78页
     ·插入片段检测第78页
     ·cDNA 文库构建第78页
     ·EST 处理及文库分析第78-81页
     ·影响文库质量的因素第81-82页
     ·相关抗病基因的分析第82-84页
     ·功能验证第84-86页
   ·结论与讨论第86-87页
6 烟草与 PVY 抗性有关的 eIF(iso)4E 克隆与分析第87-94页
   ·试验材料第87-88页
   ·试剂与仪器第88页
   ·方法第88-89页
     ·引物设计第88页
     ·PCR 扩增体系第88-89页
     ·烟草 DNA 和 RNA 的提取第89页
     ·烟草 eIF4E、eIF(iso)4E 基因 cDNA 的合成及克隆第89页
     ·RACE 克隆全长基因第89页
     ·克隆片段的测序与分析第89页
   ·结果与分析第89-93页
     ·各品种(系)DNA 筛选结果第89-90页
     ·RNA RT-PCR 扩增产物分析第90-92页
     ·CV91 品种 eIF4E 基因 RACE 克隆产物分析第92-93页
   ·结论与讨论第93-94页
7 论文总结第94-95页
参考文献第95-105页
Abstract第105-106页

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