| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| ABBREVIATIONS | 第8-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-17页 |
| ·木聚糖的介绍 | 第11页 |
| ·木聚糖酶的简介及分类 | 第11-13页 |
| ·木聚糖酶的应用 | 第13-14页 |
| ·在造纸工业的应用 | 第13页 |
| ·在食品工业的应用 | 第13-14页 |
| ·在饲料工业和其他方面的应用 | 第14页 |
| ·木聚糖酶的相关表达 | 第14-15页 |
| ·木聚糖酶的相关突变 | 第15-16页 |
| ·本文构想 | 第16-17页 |
| 第二章 木聚糖酶1YNA 的表达 | 第17-32页 |
| ·实验材料 | 第17-19页 |
| ·菌株与质粒 | 第17页 |
| ·引物合成 | 第17页 |
| ·试剂盒、工具酶和试剂 | 第17页 |
| ·实验中用到的仪器 | 第17-18页 |
| ·实验中用到的培养基 | 第18页 |
| ·实验中常用的溶液 | 第18-19页 |
| ·木聚糖酶基因1yna 的克隆 | 第19-22页 |
| ·嗜热真菌DSM10635 总DNA 的提取 | 第19页 |
| ·木聚糖酶基因1YNA 片段的获取 | 第19-20页 |
| ·相关感受态细胞的制备 | 第20页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第20-21页 |
| ·PCR 产物的连接和转化 | 第21页 |
| ·转化子的鉴定和序列测定 | 第21-22页 |
| ·木聚糖酶1YNA 的表达 | 第22-27页 |
| ·嗜热真菌DSM10635 总RNA 的提取 | 第22页 |
| ·采用重叠延伸PCR 法对木聚糖酶的编码序列进行拼接 | 第22-24页 |
| ·质粒DNA pET-22b(+)的提取 | 第24页 |
| ·目的片段xyl 和质粒DNA pET-22b(+)的双酶切 | 第24-25页 |
| ·目的片段xyl 和质粒DNA pET-22b(+)的连接和转化 | 第25-26页 |
| ·木聚糖酶转化子的PCR 鉴定和序列测定 | 第26页 |
| ·质粒pET-22b(+)-xyl 的提取及表达性宿主转化 | 第26-27页 |
| ·原核表达木聚糖酶相关酶特性研究 | 第27页 |
| ·实验结果和分析 | 第27-31页 |
| ·对测序的结果进行序列比对分析 | 第27-28页 |
| ·采用重叠延伸PCR 除去内含子 | 第28-29页 |
| ·原核表达载体pET-22b(+)-xyl 的构建 | 第29页 |
| ·表达转化子的酶活验证分析 | 第29页 |
| ·酶特性结果分析 | 第29-31页 |
| ·小结 | 第31-32页 |
| 第三章 木聚糖酶1YNA 的突变 | 第32-45页 |
| ·实验材料 | 第32-33页 |
| ·菌株 | 第32页 |
| ·引物合成 | 第32页 |
| ·试剂盒、工具酶 | 第32页 |
| ·实验中用到的仪器 | 第32页 |
| ·主要的培养基和试剂 | 第32-33页 |
| ·实验方法 | 第33-39页 |
| ·同源建模进行突变位点的确定 | 第33页 |
| ·进行突变时需要用到的引物 | 第33-34页 |
| ·定点突变木聚糖酶的单个氨基酸(以SRS2 为例) | 第34-35页 |
| ·通过定点突变在木聚糖酶中引入二硫键(以DSB1 为例) | 第35-39页 |
| ·木聚糖酶相关酶特性的测定 | 第39页 |
| ·实验结果 | 第39-44页 |
| ·木聚糖酶SRS2 的突变结果 | 第39-41页 |
| ·木聚糖酶DSB1 的突变结果 | 第41-42页 |
| ·突变酶酶特性分析的相关结果 | 第42-44页 |
| ·小结 | 第44-45页 |
| 第四章 相关木聚糖酶的分离纯化 | 第45-52页 |
| ·实验材料 | 第45-46页 |
| ·菌株 | 第45页 |
| ·实验试剂 | 第45-46页 |
| ·实验中用到的仪器 | 第46页 |
| ·实验中常用的培养基和溶液 | 第46页 |
| ·实验方法 | 第46-49页 |
| ·工程菌株的活化和培养 | 第46-47页 |
| ·木聚糖酶的HIC 柱纯化 | 第47-48页 |
| ·木聚糖酶的超滤浓缩 | 第48页 |
| ·木聚糖酶的离子交换层析 | 第48页 |
| ·目的蛋白木聚糖酶的SDS-PAGE | 第48-49页 |
| ·实验结果 | 第49-51页 |
| ·HIC 柱纯化的实验结果 | 第49-50页 |
| ·DEAE 离子交换层析柱纯化的实验结果 | 第50页 |
| ·木聚糖酶的SDS-PAGE 实验结果 | 第50-51页 |
| ·小结 | 第51-52页 |
| 结论与展望 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 附录研究生期间发表的文章 | 第62页 |
