中文摘要 | 第1-7页 |
英文摘要 | 第7-10页 |
目录 | 第10-13页 |
英文缩略词 | 第13-14页 |
前言 | 第14-16页 |
实验技术路线 | 第16-17页 |
第一章 睾丸特异表达新基因的克隆 | 第17-50页 |
1 材料和方法 | 第17-33页 |
·材料与试剂 | 第17-18页 |
·主要仪器 | 第18页 |
·PCR引物 | 第18-19页 |
·菌株和质粒载体 | 第19-20页 |
·新基因分析的主要软件与数据库 | 第20页 |
·数据库消减杂交和新基因的电子克隆 | 第20-28页 |
·睾丸组织总RNA抽提 | 第28-29页 |
·RNA逆转录合成cDNA第一链 | 第29-30页 |
·PCR验证新基因阅读框的正确性 | 第30页 |
·大肠杆菌感受态的制备 | 第30-31页 |
·连接反应 | 第31-32页 |
·转化实验 | 第32页 |
·阳性克隆的初步鉴定 | 第32-33页 |
2 结果 | 第33-46页 |
·数据库消减杂交DDD结果 | 第33-35页 |
·新基因序列分析 | 第35-39页 |
·新基因阅读框分析 | 第39页 |
·新基因阅读框的PCR验证 | 第39-40页 |
·新基因阅读框PCR产物测序 | 第40-45页 |
·新基因内含子-外显子交界 | 第45-46页 |
3 讨论 | 第46-50页 |
第二章 生物信息学分析 | 第50-86页 |
1 材料和方法 | 第50-51页 |
·主要仪器 | 第50页 |
·生物信息学数据库和分析软件 | 第50-51页 |
2 结果 | 第51-81页 |
·新基因序列同源性分析 | 第51-58页 |
·染色体定位 | 第58-66页 |
·新基因酶切位点分析 | 第66-69页 |
·新基因编码蛋白质理化性质分析 | 第69-70页 |
·蛋白质跨膜区和信号肽预测 | 第70-71页 |
·蛋白质疏水性分析 | 第71-72页 |
·蛋白质细胞内定位预测 | 第72-74页 |
·蛋白质同源性分析 | 第74-78页 |
·蛋白质功能位点分析 | 第78-81页 |
3 讨论 | 第81-86页 |
第三章 新基因功能的初步研究 | 第86-116页 |
1 材料和方法 | 第86-99页 |
·材料与试剂 | 第86-87页 |
·主要仪器 | 第87-88页 |
·PCR引物 | 第88页 |
·组织总RNA抽提 | 第88-89页 |
·RNA样品浓度的测定与质量鉴定 | 第89-90页 |
·RNA逆转录合成cDNA第一链 | 第90页 |
·PCR检测新基因表达 | 第90-91页 |
·PCR产物的纯化和回收 | 第91页 |
·大肠杆菌感受态的制备 | 第91-92页 |
·连接反应 | 第92页 |
·转化实验 | 第92-93页 |
·质粒DNA的小量抽提 | 第93-94页 |
·Northern印迹杂交 | 第94-95页 |
·组织原位杂交: 采用Septin原位杂交检测试剂盒 | 第95-98页 |
·新基因真核表达载体的构建 | 第98-99页 |
2 结果 | 第99-111页 |
·不同发育阶段的多组织RT-PCR | 第99-103页 |
·人睾丸组织原位杂交 | 第103-108页 |
·Northern杂交检测 | 第108-110页 |
·septin 12 transcript variant 2真核表达载体的构建 | 第110-111页 |
3 讨论 | 第111-116页 |
总结 | 第116-117页 |
参考文献 | 第117-124页 |
综述 | 第124-138页 |
附录 | 第138-140页 |
致谢 | 第140-141页 |
在读学位期间主要的研究成果 | 第141页 |