| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-13页 |
| 缩略词表 | 第13-14页 |
| 第一部分 实验研究 | 第14-69页 |
| 第一章 小鼠毛囊特异性表达载体pCDsR-UKA的构建 | 第14-32页 |
| 1. 材料 | 第15-16页 |
| ·主要仪器设备 | 第15页 |
| ·实验试剂与耗材 | 第15页 |
| ·菌种和质粒 | 第15页 |
| ·组织材料 | 第15页 |
| ·基因合成与测序 | 第15-16页 |
| 2. 方法 | 第16-23页 |
| ·小鼠KGF基因的分子克隆以及pBlue-KGF克隆载体的构建 | 第16-19页 |
| ·小鼠UHS基因启动子的克隆以及pMD19-UHS克隆载体的构建 | 第19-21页 |
| ·中间表达载体pB-UK的构建 | 第21-22页 |
| ·毛囊特异性表达载体pCDsR-UKA表达载体的构建 | 第22-23页 |
| 3. 结果 | 第23-28页 |
| ·小鼠肝脏组织总RNA的制备 | 第23页 |
| ·小鼠KGF全长cDNA片段的获得 | 第23-24页 |
| ·小鼠KGF的T-A克隆及其正向筛选 | 第24页 |
| ·小鼠KGF的PCR产物测序以及比对结果 | 第24页 |
| ·小鼠UHS启动子的克隆以及测序BLAST结果 | 第24-25页 |
| ·中间载体pB-UK的酶切鉴定分析 | 第25页 |
| ·重组载体pCDsR-UK的酶切分析以及BGH polyA尾的基因合成 | 第25-27页 |
| ·毛囊特异性表达载体pCDsR-UKA的酶切鉴定 | 第27-28页 |
| 4. 讨论 | 第28-29页 |
| 5. 结论 | 第29-30页 |
| 参考文献 | 第30-32页 |
| 第二章 小鼠胚胎成纤维细胞饲养层制备及ES细胞的转染条件优化 | 第32-51页 |
| 1. 材料 | 第33-35页 |
| ·主要仪器设备 | 第33页 |
| ·实验材料及细胞系 | 第33页 |
| ·主要试剂和耗材 | 第33页 |
| ·溶液配方 | 第33-35页 |
| 2. 方法 | 第35-40页 |
| ·小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)饲养层的制备 | 第35-36页 |
| ·小鼠胚胎干细胞的复苏、传代及冻存培养 | 第36-37页 |
| ·ES细胞的生物学特性检测 | 第37-39页 |
| ·pCDsR-UKA表达载体的酶切线性化及纯化 | 第39页 |
| ·脂质体Lipofectamine2000转染ES细胞条件的优化 | 第39-40页 |
| 3. 结果 | 第40-46页 |
| ·小鼠胚胎成纤维细胞和SNL细胞生长曲线的测定 | 第40-41页 |
| ·小鼠饲养层的制作与ES细胞的培养 | 第41页 |
| ·ESC的染色体数目分析 | 第41-42页 |
| ·ESC的碱性磷酸酶染色分析 | 第42页 |
| ·ESC的Oct-4免疫荧光检测 | 第42页 |
| ·ESC的SSEA-1免疫荧光检测 | 第42页 |
| ·毛囊特异性表达载体的酶切线性化 | 第42-43页 |
| ·脂质体转染条件的优化 | 第43-46页 |
| 4. 讨论 | 第46-48页 |
| 5. 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-51页 |
| 第三章 转基因ES细胞的筛选扩大培养及其鉴定 | 第51-59页 |
| 1. 材料 | 第52页 |
| ·主要仪器设备 | 第52页 |
| ·试剂和耗材 | 第52页 |
| ·实验材料 | 第52页 |
| ·溶液配方 | 第52页 |
| 2. 方法 | 第52-53页 |
| ·小鼠胚胎干细胞对G418耐受性的检测 | 第52-53页 |
| ·转基因ES细胞的筛选及扩大培养 | 第53页 |
| ·转基因胚胎干细胞的检测与鉴定 | 第53页 |
| 3. 结果 | 第53-56页 |
| ·ES细胞对G418耐受性的测定 | 第53-54页 |
| ·稳定表达RFP的小鼠ES细胞克隆的筛选与扩大培养 | 第54页 |
| ·转基因ESC的染色体数目分析 | 第54-55页 |
| ·碱性磷酸酶的染色分析 | 第55页 |
| ·转基因ES细胞的Oct-4免疫荧光染色 | 第55页 |
| ·转基因ES细胞的SSEA-1免疫荧光染色 | 第55页 |
| ·转基因ES细胞的外源基因PCR鉴定 | 第55-56页 |
| 4. 讨论 | 第56-57页 |
| 5. 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-59页 |
| 结论 | 第59-60页 |
| 图版 | 第60-69页 |
| 第二部分 文献综述 | 第69-84页 |
| 参考文献 | 第81-84页 |
| 致谢 | 第84-86页 |
| 攻读硕士学位期间已发表的学术论文 | 第86页 |
