大豆花叶病毒外壳蛋白基因扩增及病害调查
| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 1 前言 | 第9-18页 |
| ·大豆花叶病毒(SMV)的性质 | 第9-12页 |
| ·寄主范围 | 第10页 |
| ·症状表现 | 第10-12页 |
| ·传播途径 | 第12页 |
| ·大豆花叶病毒的株系及分布 | 第12-14页 |
| ·大豆花叶病毒的分子生物学研究 | 第14-16页 |
| ·SMV基因组的结构和组成 | 第14-16页 |
| ·SMV基因组的特点 | 第14页 |
| ·SMV基因组结构 | 第14-16页 |
| ·SMV的外壳蛋白CP | 第16页 |
| ·大豆花叶病毒的检测 | 第16-17页 |
| ·生物信息学在植物病毒研究中的应用 | 第17页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-28页 |
| ·材料 | 第18-20页 |
| ·毒源 | 第18页 |
| ·试剂 | 第18页 |
| ·引物 | 第18-19页 |
| ·菌株 | 第19页 |
| ·实验仪器 | 第19-20页 |
| ·软件与工具 | 第20页 |
| ·实验方法 | 第20-28页 |
| ·间接ELISA检测种子的带毒率 | 第20-21页 |
| ·播种不同品种大豆,计算出苗率并观察症状 | 第21页 |
| ·病叶总RNA提取 | 第21-22页 |
| ·单链RNA的定量 | 第22页 |
| ·反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR) | 第22-23页 |
| ·cDNA的合成 | 第22页 |
| ·PCR扩增 | 第22-23页 |
| ·PCR扩增产物1%琼脂糖凝胶电泳及切胶纯化 | 第23页 |
| ·PCR扩增产物与pMD18—T克隆载体连接 | 第23-24页 |
| ·CaCl_2法制备大肠杆菌感受态细胞 | 第24页 |
| ·连接产物对宿主感受态细胞的转化 | 第24页 |
| ·碱裂解法小量提取质粒 | 第24-25页 |
| ·重组克隆质粒的双酶切鉴定 | 第25-26页 |
| ·重组克隆质粒的PCR鉴定 | 第26页 |
| ·序列测定 | 第26页 |
| ·序列分析 | 第26页 |
| ·大豆花叶病毒外壳蛋白系统发育关系 | 第26-27页 |
| ·病害发生区病情调查 | 第27-28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-44页 |
| ·种子带毒率检测 | 第28-31页 |
| ·播种大豆田间出苗率差异 | 第31-35页 |
| ·发芽率及发病时间差异 | 第31-32页 |
| ·症状表现差异 | 第32-35页 |
| ·植物总RNA的提取 | 第35-40页 |
| ·单链RNA的定量 | 第36页 |
| ·外壳蛋白基因的RT-PCR扩增和克隆 | 第36-40页 |
| ·系统发育树分析 | 第40-43页 |
| ·大豆花叶病病情调查 | 第43-44页 |
| 4.讨论 | 第44-45页 |
| 5.小结 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 附录 | 第53-60页 |
