| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 英文缩略语(Abbreviation) | 第6-7页 |
| 目录 | 第7-11页 |
| 前言 | 第11-24页 |
| 1 链霉菌中的抗生素生物合成基因 | 第11-12页 |
| 2.链霉菌次级代谢的调控机制 | 第12-18页 |
| ·途径特异性调控 | 第12-14页 |
| ·多效调控 | 第14-17页 |
| ·全局调控 | 第17页 |
| ·次级代谢调控基因的研究方法 | 第17-18页 |
| 3.吸水链霉菌17997与格尔德霉素 | 第18-22页 |
| ·安莎类抗生素生物合成的特点 | 第18-20页 |
| ·吸水链霉菌17997与格尔德霉素 | 第20-21页 |
| ·格尔德霉素的生物合成 | 第21-22页 |
| 4.本论文的研究目的和意义 | 第22-23页 |
| 5.本实验技术路线 | 第23-24页 |
| 第一章 GDM生物合成基因簇中两个调节基因序列的获得与生物信息学分析 | 第24-36页 |
| 1.实验材料与方法 | 第24-29页 |
| ·实验材料 | 第24-26页 |
| ·菌种 | 第24页 |
| ·载体 | 第24页 |
| ·特殊试剂与酶 | 第24-25页 |
| ·实验仪器 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25-26页 |
| ·常用缓冲液 | 第26页 |
| ·实验方法 | 第26-29页 |
| ·生物信息学分析工具 | 第26-27页 |
| ·E.coli质粒DNA小量提取 | 第27页 |
| ·限制酶切反应 | 第27页 |
| ·DNA电泳及片段回收 | 第27-28页 |
| ·去磷酸化反应 | 第28页 |
| ·DNA连接反应 | 第28页 |
| ·链霉菌总DNA提取方法 | 第28页 |
| ·少量快速提取链霉菌总DNA | 第28-29页 |
| ·PCR反应 | 第29页 |
| 2.实验结果分析 | 第29-36页 |
| ·两个调节基因gdmRⅠ、gdmRⅡ序列的获得 | 第30-31页 |
| ·两个调节基因gdmRⅠ、gdmRⅡ的生物信息学分析 | 第31-36页 |
| 第二章 GDM合成基因簇中两个调节基因的阻断与阻断变株的筛选 | 第36-48页 |
| 1.实验材料与方法 | 第36-38页 |
| ·实验材料 | 第36-37页 |
| ·菌种 | 第36页 |
| ·载体和基因 | 第36页 |
| ·抗生素 | 第36-37页 |
| ·培养基 | 第37页 |
| ·实验方法 | 第37-38页 |
| ·大肠杆菌ET12567/pUZ8002与吸水链霉菌17997接合转移的方法 | 第37-38页 |
| 2.实验结果分析 | 第38-44页 |
| ·gdmRⅠ和gdmRⅡ基因阻断载体的构建 | 第38-41页 |
| ·gdmRⅠ和gdmRⅡ基因阻断株的筛选 | 第41-44页 |
| ·接合转移体系的构建 | 第41-43页 |
| ·gdmRⅠ和gdmRⅡ的基因阻断变株的PCR鉴定 | 第43-44页 |
| 3.讨论 | 第44-48页 |
| ·吸水链霉菌17997基因导入方法和载体的选择 | 第44-45页 |
| ·两个基因阻断变株载体的构建 | 第45-46页 |
| ·基因阻断变株的PCR鉴定 | 第46-48页 |
| 第三章 gdmRⅠ、gdmRⅡ基因阻断变株的发酵和产物分析 | 第48-54页 |
| 1.实验材料与方法 | 第48-50页 |
| ·实验材料 | 第48-50页 |
| ·菌种 | 第48页 |
| ·抗生素 | 第48页 |
| ·化学试剂 | 第48页 |
| ·实验仪器 | 第48页 |
| ·培养基 | 第48-50页 |
| ·实验方法 | 第50页 |
| ·发酵培养 | 第50页 |
| ·发酵培养物的提取和组分鉴定 | 第50页 |
| 2.实验结果与讨论 | 第50-54页 |
| ·gdmRⅠ和gdmRⅡ的基因阻断株在MY平板上的生长情况 | 第50-51页 |
| ·gdmRⅠ和gdmRⅡ的基因阻断株发酵提取物抗菌活性的测定 | 第51页 |
| ·gdmRⅠ和gdmRⅡ两种基因阻断变株发酵提取物的TLC鉴定 | 第51-52页 |
| ·gdmRⅠ和gdmRⅡ两种基因阻断变株发酵提取物的HPLC鉴定 | 第52-54页 |
| 第四章 gdmRⅠ、gdmRⅡ两个基因阻断变株的回复突变 | 第54-65页 |
| 1 实验材料与方法 | 第54-55页 |
| ·实验材料 | 第54-55页 |
| ·实验方法 | 第55页 |
| 2.结果与讨论 | 第55-62页 |
| ·野生型gdmRⅠ、gdmRⅡ重组质粒的构建 | 第55-57页 |
| ·载体pKC1139的改造 | 第55-57页 |
| ·gdmRⅠ基因阻断变株的回复突变 | 第57-62页 |
| 3.讨论 | 第62-65页 |
| ·回复突变的意义 | 第62页 |
| ·构建、筛选两个基因阻断变株的回复突变株 | 第62-65页 |
| 第五章 小结 | 第65-68页 |
| 1 本论文的主要实验结果 | 第65页 |
| 2 前景与展望 | 第65-68页 |
| ·今后的研究方向 | 第65-66页 |
| ·格尔德霉素改良技术的发展趋势 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
| 附录 | 第74-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
