| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-25页 |
| 第1章 前言 | 第25-35页 |
| ·肿瘤靶向治疗 | 第25-26页 |
| ·天花粉蛋白的抗肿瘤作用 | 第26-29页 |
| ·抑制肿瘤细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡 | 第26页 |
| ·抑制肿瘤细胞蛋白质的合成 | 第26-27页 |
| ·对红细胞免疫功能的作用 | 第27页 |
| ·对自然杀伤细胞的作用 | 第27-28页 |
| ·对细胞因子的作用 | 第28页 |
| ·对补体的作用 | 第28页 |
| ·对细胞免疫的作用 | 第28-29页 |
| ·对体液免疫的作用 | 第29页 |
| ·EGF受体与肿瘤的关系 | 第29-31页 |
| ·单克隆抗体 | 第30页 |
| ·免疫毒素 | 第30-31页 |
| ·过饱和EGF | 第31页 |
| ·本课题研究目的和意义 | 第31页 |
| 参考文献 | 第31-35页 |
| 第2章 天花粉蛋白的克隆、表达及纯化 | 第35-52页 |
| ·材料与方法 | 第35-45页 |
| ·常用仪器 | 第35-36页 |
| ·质粒与菌株 | 第36页 |
| ·主要试剂和酶 | 第36页 |
| ·其他试剂与材料 | 第36-37页 |
| ·主要溶液的配制 | 第37-38页 |
| ·TCS基因组的提取 | 第38页 |
| ·TCS基因片段的制备 | 第38-40页 |
| ·pQE30双酶切片段的制备 | 第40-42页 |
| ·重组质粒的构建与鉴定 | 第42-43页 |
| ·TCS蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第43-44页 |
| ·TCS蛋白的电泳及表达量检测 | 第44页 |
| ·TCS蛋白的免疫印迹鉴定 | 第44页 |
| ·TCS蛋白的纯化 | 第44-45页 |
| ·结果 | 第45-48页 |
| ·TCS基因的PCR扩增 | 第45-46页 |
| ·pQE30/TCS表达载体的构建及鉴定 | 第46页 |
| ·TCS基因序列的检测 | 第46页 |
| ·诱导表达与TCS蛋白的电泳及表达量的检测 | 第46-47页 |
| ·TCS蛋白的纯化结果 | 第47-48页 |
| ·TCS蛋白的Western blot分析 | 第48页 |
| ·讨论 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-52页 |
| 第3章 免疫毒素EGF-TCS的构建、表达及纯化 | 第52-63页 |
| ·材料与方法 | 第52-56页 |
| ·常用仪器 | 第52页 |
| ·菌株与质粒 | 第52页 |
| ·主要试剂和酶 | 第52页 |
| ·其他试剂与材料 | 第52-53页 |
| ·EGF基因片段的制备 | 第53-54页 |
| ·pQE30/TCS双酶切片段的制备 | 第54-55页 |
| ·重组质粒的构建与鉴定 | 第55-56页 |
| ·EGF-TCS蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第56页 |
| ·EGF-TCS蛋白的电泳及表达量检测 | 第56页 |
| ·EGF-TCS蛋白的免疫印迹鉴定 | 第56页 |
| ·EGF-TCS蛋白的纯化 | 第56页 |
| ·结果 | 第56-60页 |
| ·EGF的PCR扩增 | 第56-57页 |
| ·EGF-TCS表达载体的构建 | 第57-58页 |
| ·EGF-TCS基因序列的测定 | 第58页 |
| ·EGF-TCS蛋白的表达及纯化和免疫印迹分析 | 第58-60页 |
| ·讨论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-63页 |
| 第4章 免疫毒素EGF-Linker-TCS的构建、表达及纯化 | 第63-73页 |
| ·材料与方法 | 第63-66页 |
| ·常用仪器 | 第63页 |
| ·菌株与质粒 | 第63页 |
| ·主要试剂和酶 | 第63页 |
| ·其他试剂与材料 | 第63-64页 |
| ·主要溶液的配制 | 第64页 |
| ·EGF-Linker基因片段的制备 | 第64-65页 |
| ·重组质粒的构建与鉴定 | 第65-66页 |
| ·EGF-Linker-TCS蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第66页 |
| ·EGF-Linker-TCS蛋白的电泳及表达量检测 | 第66页 |
| ·EGF-Linker-TCS蛋白的免疫印迹鉴定 | 第66页 |
| ·EGF-Linker-TCS蛋白的纯化 | 第66页 |
| ·结果 | 第66-70页 |
| ·EGF-Linker的PCR扩增 | 第67页 |
| ·EGF-Linker-TCS表达载体的构建 | 第67-68页 |
| ·EGF-Linker-TCS基因序列的测定 | 第68页 |
| ·EGF-Linker-TCS蛋白的表达及纯化和免疫印迹分析 | 第68-70页 |
| ·讨论 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-73页 |
| 第5章 免疫毒素EGF-TCS、EGF-Linker-TCS对肿瘤细胞的体外靶向杀伤作用 | 第73-86页 |
| ·材料与方法 | 第73-76页 |
| ·主要仪器 | 第73-74页 |
| ·主要试剂 | 第74页 |
| ·主要溶液的配制 | 第74页 |
| ·细胞株及细胞培养 | 第74-75页 |
| ·流式细胞仪检测细胞表面的EGFR表达 | 第75页 |
| ·EGF-TCS、EGF-Linker-TCS对肿瘤细胞生长抑制实验 | 第75-76页 |
| ·EGF-TCS、EGF-Linker-TCS选择性诱导细胞凋亡的检测 | 第76页 |
| ·电镜观察EGF-Linker-TCS对BEL-7402细胞的影响 | 第76页 |
| ·结果 | 第76-81页 |
| ·流式细胞仪检测细胞表面的EGFR表达量 | 第76-77页 |
| ·EGF-TCS、EGF-Linker-TCS对肿瘤细胞的选择性杀伤作用 | 第77-78页 |
| ·EGF-TCS、EGF-Linker-TCS诱导细胞凋亡的检测 | 第78-80页 |
| ·电镜观察EGF-Linker-TCS对肝癌BEL-7402细胞的影响 | 第80-81页 |
| ·讨论 | 第81-84页 |
| 参考文献 | 第84-86页 |
| 第6章 免疫毒素EGF-Linker-TCS对荷人肝癌裸鼠移植瘤的实验研究 | 第86-95页 |
| ·材料与方法 | 第86-88页 |
| ·主要试剂 | 第86页 |
| ·主要仪器 | 第86-87页 |
| ·细胞株及培养 | 第87页 |
| ·实验动物 | 第87页 |
| ·荷肝癌裸鼠动物模型的建立 | 第87页 |
| ·分组及给药 | 第87页 |
| ·小鼠体内抑瘤实验 | 第87-88页 |
| ·肿瘤肝转移灶观察 | 第88页 |
| ·肿瘤组织免疫组织化学实验 | 第88页 |
| ·统计方法 | 第88页 |
| ·结果 | 第88-92页 |
| ·EGF-Linker-TCS对荷人肝癌小鼠体内抑瘤实验结果 | 第88-90页 |
| ·EGF-Linker-TCS对荷人肝癌小鼠移植肿瘤肝转移的抑制效果 | 第90页 |
| ·肿瘤组织免疫组织化学结果 | 第90-92页 |
| ·讨论 | 第92-94页 |
| 参考文献 | 第94-95页 |
| 全文总结 | 第95-97页 |
| 文献综述 | 第97-109页 |
| 附录 | 第109-114页 |
| 研究生学习期间成果 | 第114-115页 |
| 致谢 | 第115-116页 |
