| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-16页 |
| 第一章 前言 | 第16-38页 |
| ·石油危机与燃料乙醇 | 第16-17页 |
| ·纤维素 | 第17-19页 |
| ·纤维素酶 | 第19-28页 |
| ·纤维素酶的作用方式和纤维素的降解 | 第19-20页 |
| ·纤维素酶的分类,分子结构与催化机理 | 第20-22页 |
| ·纤维素酶的来源 | 第22-23页 |
| ·微生物的两种典型的纤维素酶系统 | 第23-25页 |
| ·纤维素酶的应用 | 第25-26页 |
| ·草食性哺乳动物的消化系统和其中的纤维素酶 | 第26-28页 |
| ·未培养微生物的研究 | 第28-36页 |
| ·未培养微生物 | 第28-30页 |
| ·未培养微生物的培养 | 第30页 |
| ·未培养微生物的宏基因组的研究 | 第30-31页 |
| ·环境微生物宏基因组DNA的提取和纯化 | 第31-32页 |
| ·宏基因组文库的构建 | 第32页 |
| ·宏基因组文库的筛选 | 第32-33页 |
| ·未培养微生物纤维素酶基因的克隆 | 第33-35页 |
| ·宏基因组文库的测序 | 第35-36页 |
| ·本研究的目的 | 第36-38页 |
| 第二章 材料与方法 | 第38-63页 |
| ·菌株和质粒 | 第38-39页 |
| ·常规实验技术 | 第39-46页 |
| ·培养基、培养条件、抗生素和常规试剂 | 第39-41页 |
| ·基本实验方法 | 第41-46页 |
| ·兔子盲肠未培养微生物宏基因组DNA的提取和纯化 | 第46-48页 |
| ·兔子盲肠内容物样品的采集 | 第47页 |
| ·兔子盲肠的内容物宏基因组DNA的提取 | 第47页 |
| ·宏基因组DNA的纯化 | 第47-48页 |
| ·兔子盲肠细菌16S rRNA基因文库的构建和细菌的多样性分析 | 第48-49页 |
| ·兔子盲肠细菌16S rRNA基因文库的构建 | 第48页 |
| ·兔子盲肠细菌的多样性分析 | 第48-49页 |
| ·兔子盲肠未培养微生物宏基因组文库的构建 | 第49-50页 |
| ·宏基因组DNA文库的筛选 | 第50-51页 |
| ·表达内切葡聚糖酶活性克隆的筛选 | 第50-51页 |
| ·表达葡萄糖苷酶活性克隆的筛选 | 第51页 |
| ·表达外切葡聚糖酶活性克隆的筛选 | 第51页 |
| ·阳性克隆的转化验证 | 第51页 |
| ·纤维素酶基因的亚克隆和测序 | 第51-52页 |
| ·纤维素酶基因的序列分析 | 第52页 |
| ·活性亚克隆的初步酶学特性分析 | 第52-56页 |
| ·粗酶液的制备 | 第52页 |
| ·活性亚克隆表达纤维素酶的酶谱分析 | 第52-53页 |
| ·内切葡聚糖酶的酶活力测定 | 第53-54页 |
| ·葡萄糖苷酶的活力测定 | 第54-56页 |
| ·酶的最适pH值的测定 | 第56页 |
| ·酶的最适温度的测定 | 第56页 |
| ·内切葡聚糖酶的底物特异性试验 | 第56页 |
| ·内切葡聚糖酶基因umcel5G的表达、重组酶的纯化和酶学特性研究 | 第56-60页 |
| ·内切葡聚糖酶基因umcel5G的表达 | 第56-57页 |
| ·重组蛋白Umcel5G的纯化 | 第57-59页 |
| ·纯化的重组酶Umcel5G的酶学特性测定 | 第59-60页 |
| ·B-葡萄糖苷酶基因umbgl3B的表达、重组酶的纯化和酶学特性研究 | 第60-63页 |
| ·β-葡萄糖苷酶基因umbgl3B的表达 | 第60-61页 |
| ·重组Umbgl3B的纯化 | 第61-62页 |
| ·重组Umbgl3B的酶学性质测定 | 第62-63页 |
| 第三章 结果与分析 | 第63-109页 |
| ·兔子盲肠内容物的宏基因组DNA的提取和纯化 | 第63-65页 |
| ·直接提取法提取宏基因组DNA | 第63-64页 |
| ·宏基因组DNA的纯化和回收 | 第64-65页 |
| ·兔子盲肠内容物的细菌多样性分析 | 第65-70页 |
| ·兔子盲肠细菌的16S rRNA基因文库的构建 | 第65页 |
| ·兔子盲肠细菌16S rRNA基因序列的分析 | 第65-70页 |
| ·兔子盲肠未培养微生物宏基因组文库的构建 | 第70-72页 |
| ·宏基因组文库的构建 | 第70页 |
| ·宏基因组文库的质量评价 | 第70-72页 |
| ·兔子盲肠内容物宏基因组文库中纤维素酶活性克隆的筛选 | 第72-76页 |
| ·内切葡聚糖酶活性克隆的筛选及转化验证 | 第72-73页 |
| ·β-葡萄糖苷酶活性克隆的筛选及转化验证 | 第73-75页 |
| ·外切葡聚糖酶活性克隆的筛选 | 第75-76页 |
| ·兔子盲肠未培养微生物纤维素酶基因的克隆和鉴定 | 第76-85页 |
| ·内切葡聚糖酶基因的克隆和序列分析 | 第76-79页 |
| ·β-葡萄糖苷酶基因的克隆和序列分析 | 第79-85页 |
| ·兔子盲肠未培养微生物纤维素酶的遗传进化树分析 | 第85-87页 |
| ·表达纤维素酶活性的亚克隆粗酶液的酶学特性 | 第87-91页 |
| ·亚克隆粗酶液的酶谱分析 | 第87-88页 |
| ·亚克隆粗酶液的最适作用pH值和最适作用温度 | 第88-89页 |
| ·表达内切葡聚糖酶活性的亚克隆粗酶液的底物特异性 | 第89-91页 |
| ·内切葡聚糖酶基因umcel5G的表达以及重组酶UMCEL5G的纯化和酶学特性研究 | 第91-101页 |
| ·内切葡聚糖酶基因umcel5G的表达 | 第91-93页 |
| ·Umcel5G的纯化 | 第93-94页 |
| ·重组Umcel5G的酶学特性分析 | 第94-101页 |
| ·B-葡萄糖苷酶基因umbgl3B的表达以及重组酶UMBGL3B的纯化和酶学特性研究 | 第101-109页 |
| ·β-葡萄糖苷酶基因umbgl3B的表达 | 第101-102页 |
| ·重组β-葡萄糖苷酶Umbgl3B的纯化 | 第102-103页 |
| ·Umbgl3B的酶学特性分析 | 第103-109页 |
| 第四章 总结与讨论 | 第109-118页 |
| ·兔子盲肠内容物宏基因组DNA的提取和纯化 | 第109-110页 |
| ·兔子盲肠中细菌的多样性分析 | 第110-111页 |
| ·兔子盲肠未培养微生物宏基因组文库的构建和筛选 | 第111页 |
| ·兔子盲肠中的纤维素酶的生物信息学分析 | 第111-112页 |
| ·兔子盲肠纤维素酶的酶学特性 | 第112-115页 |
| ·粗酶液的酶学特性分析 | 第113-114页 |
| ·重组Umcel5G的酶学特性分析 | 第114页 |
| ·重组Umbgl3B的酶学特性分析 | 第114-115页 |
| ·未克隆到外切葡聚糖酶的原因分析 | 第115-116页 |
| ·兔子盲肠纤维素酶基因的进一步研究设想 | 第116-117页 |
| ·本研究的创新点 | 第117-118页 |
| 参考文献 | 第118-132页 |
| 致谢 | 第132-133页 |
| 攻读博士学位期间所发表论文和取得的研究成果 | 第133-134页 |
