| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1 绪论 | 第10-17页 |
| ·欧美杨简介 | 第10页 |
| ·硫氧还蛋白基因的研究进展 | 第10-15页 |
| ·Trx的类型和组织分布 | 第11-12页 |
| ·Trx的生物学功能 | 第12-14页 |
| ·Trx与植物抗逆性的关系 | 第14-15页 |
| ·利用转基因植物研究评价Trx的基因功能 | 第15页 |
| ·真核表达系统——酵母 | 第15页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第15-17页 |
| 2 Trx基因的酵母表达和抗逆性分析 | 第17-33页 |
| ·Trx基因酵母表达载体的构建 | 第17-27页 |
| ·实验材料 | 第17-20页 |
| ·实验方法 | 第20-22页 |
| ·结果与分析 | 第22-24页 |
| ·酵母重组表达载体的获得 | 第24-26页 |
| ·pYES-Trx及载体pYES2的酵母遗传转化 | 第26-27页 |
| ·INVSc1(pYES-Trx)的菌落PCR检测 | 第27页 |
| ·重组酵母INVSc1(pYES-Trx)的抗逆性分析 | 第27-29页 |
| ·菌株 | 第27页 |
| ·主要试剂 | 第27-28页 |
| ·INVSc1(pYES-Trx)的NaCl胁迫处理 | 第28页 |
| ·INVSc1(pYES-Trx)的Na_2CO_3胁迫处理 | 第28页 |
| ·INVSc1(pYES-Trx)的NaHCO_3胁迫处理 | 第28页 |
| ·INVSc1(pYES-Trx)的旱胁迫处理 | 第28页 |
| ·INVSc1(pYES-Trx)的紫外线胁迫处理 | 第28-29页 |
| ·INVSc1(pYES-Trx)的高温胁迫处理 | 第29页 |
| ·实验结果 | 第29-32页 |
| ·INVSc1(pYES-Trx)重组酵母的抗NaCl能力提高 | 第29页 |
| ·INVSc1(pYES-Trx)重组酵母的抗盐碱性提高 | 第29-30页 |
| ·INVSc1(pYES-Trx)重组酵母的耐干旱性增强 | 第30-31页 |
| ·INVSc1(pYES-Trx)的紫外线胁迫处理 | 第31页 |
| ·INVSc1(pYES-Trx)的高温胁迫处理 | 第31-32页 |
| ·本章小结 | 第32-33页 |
| 3 欧美杨组培体系的建立 | 第33-39页 |
| ·材料与方法 | 第33页 |
| ·实验材料 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33页 |
| ·结果 | 第33-36页 |
| ·不定芽的诱导 | 第33-34页 |
| ·继代培养 | 第34页 |
| ·再生苗的抽茎培养 | 第34-35页 |
| ·生根培养 | 第35页 |
| ·再生苗的移栽 | 第35-36页 |
| ·抗生素浓度的确定 | 第36-38页 |
| ·抑菌性抗生素敏感性实验 | 第36页 |
| ·选择性抗生素敏感性实验 | 第36-38页 |
| ·本章小结 | 第38-39页 |
| ·欧美杨不同阶段最佳培养基与激素含量 | 第38页 |
| ·欧美杨抗生素敏感实验 | 第38-39页 |
| 4 硫氧还蛋白植物表达载体的构建及欧美杨的遗传转化 | 第39-52页 |
| ·实验材料 | 第39-42页 |
| ·菌株和质粒 | 第39页 |
| ·培养基 | 第39-40页 |
| ·酶和试剂 | 第40-41页 |
| ·PCR扩增引物序列 | 第41页 |
| ·杂交检测试剂 | 第41页 |
| ·酶类和试剂盒 | 第41-42页 |
| ·硫氧还蛋白基因表达载体的构建 | 第42-44页 |
| ·实验方法 | 第42-43页 |
| ·Trx基因农杆菌的遗传转化 | 第43-44页 |
| ·通过叶盘转化法对欧美杨进行硫氧还蛋白基因的遗传转化 | 第44-47页 |
| ·无菌苗的继代培养 | 第44页 |
| ·根癌农杆菌介导的欧美杨的遗传转化 | 第44页 |
| ·转化欧美杨的PCR检测 | 第44-45页 |
| ·转基因欧美杨的Northern检测 | 第45-47页 |
| ·结果与分析 | 第47-51页 |
| ·植物表达载体pPT的鉴定 | 第47-49页 |
| ·欧美杨高效组培体系的建立 | 第49页 |
| ·工程菌的获得 | 第49页 |
| ·转基因欧美杨基因组DNA的提取 | 第49页 |
| ·转基因欧美杨的PCR检测 | 第49-50页 |
| ·Northern杂交检测 | 第50-51页 |
| ·本章小结 | 第51-52页 |
| 5 Trx基因的功能验证 | 第52-60页 |
| ·实验材料 | 第52页 |
| ·植物材料 | 第52页 |
| ·试剂 | 第52页 |
| ·主要仪器:叶绿素仪 | 第52页 |
| ·实验方法 | 第52-54页 |
| ·超氧化物歧化酶(SOD)活性测定 | 第52-53页 |
| ·丙二醛(MDA)含量测定 | 第53页 |
| ·相对电导率的测定 | 第53页 |
| ·相对生长量调查 | 第53页 |
| ·叶绿素含量的测定 | 第53-54页 |
| ·结果与分析 | 第54-58页 |
| ·转基因欧美杨在高度上变化 | 第54页 |
| ·干旱胁迫下转基因欧美杨与对照相对电导率 | 第54-55页 |
| ·干旱胁迫下转基因欧美杨与对照叶绿素含量的比较 | 第55-56页 |
| ·干旱胁迫下转基因欧美杨与对照SOD活性的比较 | 第56-57页 |
| ·干旱胁迫下转基因欧美杨与对照欧美杨MDA含量的比较 | 第57-58页 |
| ·本章小结 | 第58-60页 |
| 6 讨论 | 第60-63页 |
| ·欧美杨组织培养中的"玻璃化现象"及褐化现象 | 第60页 |
| ·Trx转化酵母的目的和意义 | 第60页 |
| ·转Trx基因欧美杨的抗旱调节机制 | 第60-61页 |
| ·欧美杨抗旱性的提高 | 第61-62页 |
| ·问题与展望 | 第62-63页 |
| 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-68页 |
| 附录 | 第68-69页 |
| 图版 | 第69-70页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
