| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 1 引言 | 第13-22页 |
| ·研究意义 | 第13-21页 |
| ·肿瘤基因治疗的研究现状 | 第13-15页 |
| ·PCN305载体 | 第15-16页 |
| ·STAT3的研究背景 | 第16-19页 |
| ·SOCS3的研究背景 | 第19-21页 |
| ·本研究课题的来源和主要研究内容 | 第21-22页 |
| ·课题的来源 | 第21页 |
| ·主要研究内容 | 第21-22页 |
| 2 实验材料与方法 | 第22-43页 |
| ·实验材料 | 第22-26页 |
| ·实验仪器和设备 | 第22页 |
| ·质粒和菌株 | 第22-23页 |
| ·工具酶和主要试剂 | 第23页 |
| ·试剂盒 | 第23页 |
| ·实验动物 | 第23页 |
| ·细胞和毒株 | 第23页 |
| ·培养细胞用液 | 第23-24页 |
| ·抗体及其它 | 第24页 |
| ·常用溶液的配制 | 第24-26页 |
| ·实验方法 | 第26-43页 |
| ·实验技术路线 | 第26-27页 |
| ·质粒构建流程 | 第27-29页 |
| ·SOCS3的获取 | 第29-30页 |
| ·转移载体PMD-18T-SOCS3的构建 | 第30-32页 |
| ·转移载体PMD-18T-cpp-SOCS3的构建 | 第32页 |
| ·转移载体PBS/IRES-SOCS3的构建 | 第32页 |
| ·转移载体PBS/IRES-cpp-SOCS3的构建 | 第32-33页 |
| ·转移载体PCZ305-SOCS3的构建 | 第33页 |
| ·转移载体PCZ305-cpp-SOCS3的构建 | 第33页 |
| ·重组质粒PCN305-SOCS3的构建 | 第33-34页 |
| ·重组质粒PCN305-cpp-SOCS3的构建 | 第34页 |
| ·病毒的包装 | 第34-36页 |
| ·病毒的小量扩增及鉴定 | 第36页 |
| ·病毒的大量扩增及纯化 | 第36-37页 |
| ·病毒的滴定(空斑法) | 第37-38页 |
| ·重组病毒在不同细胞中复制能力的测定 | 第38页 |
| ·病毒感染后SOCS3在细胞中表达水平的分析 | 第38-39页 |
| ·多种细胞中SOCS3的mRNA表达及 Stat3磷酸化水平检测 | 第39页 |
| ·重组病毒在体外对不同细胞的活力影响 | 第39-40页 |
| ·SOCS3对 STAT3磷酸化水平及下游效应因子表达的影响 | 第40页 |
| ·SOCS3诱导肿瘤细胞凋亡 | 第40-41页 |
| ·重组病毒治疗肝癌移植瘤体内实验研究 | 第41-43页 |
| 3 实验结果及分析 | 第43-62页 |
| ·SOCS3基因的获取 | 第43-44页 |
| ·HEK293细胞总RNA的提取 | 第43页 |
| ·目的基因的扩增 | 第43-44页 |
| ·转移载体PMD-18T-SOCS3的构建 | 第44-45页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第44-45页 |
| ·转移载体 PMD-18T-cpp-SOCS3的构建 | 第45页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第45页 |
| ·转移载体PBS/IRES-SOCS3的构建 | 第45-47页 |
| ·目的片段的获得 | 第45-46页 |
| ·载体的处理 | 第46页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第46-47页 |
| ·转移载体 PBS/IRES-cpp-SOCS3的构建 | 第47-48页 |
| ·目的片段的获得 | 第47页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第47-48页 |
| ·转移载体 PCZ305-SOCS3的构建 | 第48-50页 |
| ·目的片段的获得 | 第48-49页 |
| ·载体的处理 | 第49页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第49-50页 |
| ·转移载体PCZ305-cpp-SOCS3的构建 | 第50-51页 |
| ·目的片段的获得 | 第50页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第50-51页 |
| ·重组质粒 PCN305-SOCS3的构建 | 第51-52页 |
| ·PCR鉴定阳性克隆 | 第51-52页 |
| ·酶切鉴定阳性克隆 | 第52页 |
| ·重组质粒 PCN305-cpp-SOCS3的构建 | 第52-54页 |
| ·PCR鉴定阳性克隆 | 第52-53页 |
| ·酶切鉴定阳性克隆 | 第53-54页 |
| ·重组病毒的小量扩增及鉴定 | 第54页 |
| ·PCR鉴定重组病毒 | 第54页 |
| ·SOCS3在肿瘤细胞中表达沉默或下调 | 第54-55页 |
| ·Stat3在多种细胞中的磷酸化水平 | 第55-56页 |
| ·重组病毒在不同细胞中的复制能力 | 第56页 |
| ·病毒感染后 SOCS3细胞中的表达能力 | 第56-57页 |
| ·重组病毒在体外对不同细胞的活力的影响 | 第57-58页 |
| ·SOCS3对 STAT3磷酸化及下游效应因子表达的抑制 | 第58-59页 |
| ·SOCS3诱导肿瘤细胞凋亡 | 第59-60页 |
| ·重组病毒表达治疗肝癌移植瘤体内实验研究 | 第60-62页 |
| 4 讨论 | 第62-64页 |
| 5 结论 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文及专利 | 第72页 |
