| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-35页 |
| 1 蛋白酶的分类 | 第11-12页 |
| 2 蛋白酶对蛋白质水解作用及其应用 | 第12-15页 |
| ·洗涤剂行业 | 第12-14页 |
| ·食品和饲料行业 | 第14页 |
| ·短肽合成 | 第14-15页 |
| ·皮革工业 | 第15页 |
| ·纺织工业 | 第15页 |
| 3 微生物产碱性蛋白酶的概况 | 第15-16页 |
| 4 固体发酵生产蛋白酶 | 第16-21页 |
| ·固体发酵的优点和局限性 | 第16-18页 |
| ·固体发酵工艺条件 | 第18-19页 |
| ·固体发酵进展 | 第19-20页 |
| ·固体发酵的产物 | 第20页 |
| ·蛋白酶固体发酵 | 第20-21页 |
| 5 蛋白酶酶活测定 | 第21-22页 |
| ·蛋白酶的定性测定 | 第21页 |
| ·蛋白酶的定量测定 | 第21-22页 |
| 6 碱性蛋白酶的分离纯化 | 第22-25页 |
| ·根据蛋白分子大小所采用的蛋白分离方法 | 第23页 |
| ·根据蛋白溶解度不同所采用的蛋白分离方法 | 第23-24页 |
| ·根据蛋白电荷性质差异所采用的蛋白分离方法 | 第24页 |
| ·根据蛋白疏水特性分离纯化蛋白 | 第24-25页 |
| ·碱性蛋白酶的分离纯化 | 第25页 |
| 7 碱性蛋白酶的性质 | 第25-26页 |
| ·碱性蛋白酶温度和pH动力学 | 第25页 |
| ·添加剂和金属离子对碱性蛋白酶耐热性的影响 | 第25-26页 |
| ·碱性蛋白酶底物特异性 | 第26页 |
| 8 碱性蛋白酶的基因克隆 | 第26-32页 |
| ·基因组文库和cDNA文库的构建和基因的筛选 | 第26-27页 |
| ·简并引物克隆和其它扩增方法结合克隆基因 | 第27-28页 |
| ·反转录PCR（RT-PCR） | 第28-30页 |
| ·碱性蛋白酶基因工程 | 第30-32页 |
| 9 海洋酵母研究进展 | 第32-33页 |
| 10 论文的研究目的与意义 | 第33-35页 |
| 第二章 海洋酵母普鲁兰类酵母 A. pullulans 10 固体发酵生产碱性蛋白酶的研究 | 第35-44页 |
| 1 前言 | 第35-36页 |
| 2 材料和方法 | 第36-38页 |
| ·材料 | 第36页 |
| ·方法 | 第36-38页 |
| 3 结果和讨论 | 第38-43页 |
| ·固体发酵培养基的优化 | 第38-40页 |
| ·固体发酵培养条件的优化 | 第40-43页 |
| 4 本章小结 | 第43-44页 |
| 第三章 海洋酵母普鲁兰类酵母 A. pullula11510 液体发酵生产蛋白酶及酶的分离纯化和特性研究 | 第44-62页 |
| 1 前言 | 第44-45页 |
| 2 材料和方法 | 第45-52页 |
| ·菌株 | 第45页 |
| ·培养基和试剂 | 第45-46页 |
| ·方法 | 第46-52页 |
| 3 结果和讨论 | 第52-60页 |
| ·蛋白酶的液体发酵生产 | 第52页 |
| ·蛋白酶发酵液浓缩及Sephradex~(TM) G-75凝胶层析部分纯化 | 第52页 |
| ·DEAE-Sephorose Fast Flow阴离子交换层析柱纯化 | 第52-54页 |
| ·蛋白酶纯化过程参数和不连续SDS-PAGE凝胶电泳 | 第54-55页 |
| ·纯化蛋白酶最适温度和对温度的稳定性 | 第55页 |
| ·纯化蛋白酶最适pH和对pH的稳定性 | 第55-57页 |
| ·金属离子对蛋白酶Alp1酶活的影响 | 第57-59页 |
| ·蛋白抑制剂对纯化蛋白酶Alp1酶活的影响 | 第59-60页 |
| ·动力学常数Km和最大反应速度Vmax | 第60页 |
| 4 本章小结 | 第60-62页 |
| 第四章 碱性蛋白酶Alp1酶解蛋白产生物活性肽的研究 | 第62-68页 |
| 1 前言 | 第62-63页 |
| 2 材料和方法 | 第63-66页 |
| ·材料 | 第63页 |
| ·方法 | 第63-66页 |
| 3 结果和讨论 | 第66-67页 |
| ·蛋白水解产物抗氧化活性和抑制ACE活性 | 第66页 |
| ·蛋白水解产物抗菌活性 | 第66-67页 |
| 4 本章小结 | 第67-68页 |
| 第五章 海洋酵母普鲁兰类酵母 A. pullulans 10 碱性蛋白酶 Alp1的基因克隆 | 第68-103页 |
| 1 引言 | 第68页 |
| 2 材料和方法 | 第68-80页 |
| ·菌株 | 第68-69页 |
| ·培养基和试剂 | 第69-71页 |
| ·方法 | 第71-80页 |
| 3 结果和讨论 | 第80-98页 |
| ·简并PCR引物的设计 | 第80-84页 |
| ·简并PCR克隆碱性蛋白酶Alp1部分基因 | 第84-86页 |
| ·反向PCR获得碱性蛋白酶Alp1全部基因及两侧部分部分基因 | 第86-88页 |
| ·碱性蛋白酶基因alp1生物信息学分析 | 第88-98页 |
| 4 本章小结 | 第98-103页 |
| 参考文献 | 第103-117页 |
| 总结与创新点 | 第117-118页 |
| 附录 | 第118-119页 |
| 攻读博士期间发表论文 | 第119-120页 |
| 致谢 | 第120页 |
