中文摘要 | 第1-6页 |
英文摘要 | 第6-15页 |
前言 | 第15-23页 |
一、MK 分子生物学特性与蛋白结构 | 第15-17页 |
二、MK 的生物学功能 | 第17-19页 |
1. 神经营养活性 | 第17-18页 |
2. 修复受损组织和促进血管生成 | 第18页 |
3. 促纤溶活性 | 第18页 |
4. 促生长分化功能 | 第18页 |
5. 其他 | 第18-19页 |
三、MK 的分布 | 第19页 |
四、MK 与疾病的关系 | 第19-21页 |
1. MK 与肿瘤/癌变的关系 | 第19-20页 |
2. MK 与老年痴呆(Alzheimer’s Disease) | 第20页 |
3. MK 与HIV | 第20-21页 |
4. 其他 | 第21页 |
五、截短型(truncated)MK 发现及生物学特性 | 第21-22页 |
六、展望 | 第22-23页 |
材料与方法 | 第23-35页 |
一、生物材料与主要实验仪器、试剂 | 第23-24页 |
1. 生物材料 | 第23页 |
2. 主要仪器 | 第23-24页 |
3. 主要试剂来源 | 第24页 |
二、主要试剂配制 | 第24-25页 |
1. LB 培养基配制 | 第24页 |
2. 1mol/L CaC12贮存液配制 | 第24页 |
3. 质粒抽提/裂解缓冲液配制 | 第24页 |
4. 0.1mol/L IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)配制 | 第24-25页 |
5. 考马司亮蓝染液配制 | 第25页 |
6. 2×SDS 凝胶加样缓冲液配制 | 第25页 |
7. 15%SDS 聚丙烯酰胺凝胶配制 | 第25页 |
8. 磷酸缓冲溶液(PBS)配制 | 第25页 |
三、实验方法 | 第25-35页 |
1. 解剖 | 第25-26页 |
2. 免疫组化 | 第26页 |
3. RNA 提取 | 第26-27页 |
4. RT-PCR | 第27-29页 |
5. PCR 产物回收 | 第29页 |
6. 克隆转化 | 第29-31页 |
7. 质粒提取 | 第31页 |
8. 酶切鉴定并测序 | 第31-32页 |
9. 表达载体的构建 | 第32页 |
10. 诱导表达 | 第32-33页 |
11. 表达蛋白提取 | 第33-34页 |
12. 蛋白活性测定 | 第34-35页 |
实验结果及分析 | 第35-49页 |
一、MK 在小鼠胚胎发育中的表达 | 第35-36页 |
二、截短型MK 特异表达于正常器官形成中某个时期 | 第36-37页 |
三、新截短型MK 克隆和测序分析 | 第37-39页 |
四、MK 在组织分化和干细胞更新分化中功能 | 第39-40页 |
五、MK 在干细胞中的表达 | 第40-41页 |
六、tMK-B 和tMK-C 的发现 | 第41-45页 |
七、PET-tMK 及PET-MK 重组载体的构建及诱导表达 | 第45-46页 |
八、功能鉴定 | 第46-49页 |
讨论 | 第49-54页 |
一、MK 的表达与分布 | 第49-50页 |
二、MK 及截短型 MK(tMK)在肿瘤中的表达 | 第50页 |
三、小鼠 MK 及截短型 MK | 第50-52页 |
四、新的剪接形式 | 第52页 |
五、功能 | 第52-54页 |
结语 | 第54-55页 |
参考文献 | 第55-61页 |
附录一 | 第61-62页 |
附录二 | 第62-64页 |
致谢 | 第64页 |