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Midkine新亚型和相应RNA新剪切形式的发现--它在小鼠胚胎发育与肿瘤生成过程中表达与功能初探

中文摘要第1-6页
英文摘要第6-15页
前言第15-23页
 一、MK 分子生物学特性与蛋白结构第15-17页
 二、MK 的生物学功能第17-19页
  1. 神经营养活性第17-18页
  2. 修复受损组织和促进血管生成第18页
  3. 促纤溶活性第18页
  4. 促生长分化功能第18页
  5. 其他第18-19页
 三、MK 的分布第19页
 四、MK 与疾病的关系第19-21页
  1. MK 与肿瘤/癌变的关系第19-20页
  2. MK 与老年痴呆(Alzheimer’s Disease)第20页
  3. MK 与HIV第20-21页
  4. 其他第21页
 五、截短型(truncated)MK 发现及生物学特性第21-22页
 六、展望第22-23页
材料与方法第23-35页
 一、生物材料与主要实验仪器、试剂第23-24页
  1. 生物材料第23页
  2. 主要仪器第23-24页
  3. 主要试剂来源第24页
 二、主要试剂配制第24-25页
  1. LB 培养基配制第24页
  2. 1mol/L CaC12贮存液配制第24页
  3. 质粒抽提/裂解缓冲液配制第24页
  4. 0.1mol/L IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)配制第24-25页
  5. 考马司亮蓝染液配制第25页
  6. 2×SDS 凝胶加样缓冲液配制第25页
  7. 15%SDS 聚丙烯酰胺凝胶配制第25页
  8. 磷酸缓冲溶液(PBS)配制第25页
 三、实验方法第25-35页
  1. 解剖第25-26页
  2. 免疫组化第26页
  3. RNA 提取第26-27页
  4. RT-PCR第27-29页
  5. PCR 产物回收第29页
  6. 克隆转化第29-31页
  7. 质粒提取第31页
  8. 酶切鉴定并测序第31-32页
  9. 表达载体的构建第32页
  10. 诱导表达第32-33页
  11. 表达蛋白提取第33-34页
  12. 蛋白活性测定第34-35页
实验结果及分析第35-49页
 一、MK 在小鼠胚胎发育中的表达第35-36页
 二、截短型MK 特异表达于正常器官形成中某个时期第36-37页
 三、新截短型MK 克隆和测序分析第37-39页
 四、MK 在组织分化和干细胞更新分化中功能第39-40页
 五、MK 在干细胞中的表达第40-41页
 六、tMK-B 和tMK-C 的发现第41-45页
 七、PET-tMK 及PET-MK 重组载体的构建及诱导表达第45-46页
 八、功能鉴定第46-49页
讨论第49-54页
 一、MK 的表达与分布第49-50页
 二、MK 及截短型 MK(tMK)在肿瘤中的表达第50页
 三、小鼠 MK 及截短型 MK第50-52页
 四、新的剪接形式第52页
 五、功能第52-54页
结语第54-55页
参考文献第55-61页
附录一第61-62页
附录二第62-64页
致谢第64页

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