| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-8页 |
| 第一章 前言 | 第8-18页 |
| ·海藻糖的性质 | 第8-10页 |
| ·海藻糖的应用 | 第10-12页 |
| ·海藻糖的制备方法 | 第12-15页 |
| ·海藻糖国内外研究现状 | 第15-16页 |
| ·研究的目的和意义 | 第16-18页 |
| 第二章 材料与方法 | 第18-28页 |
| ·材料 | 第18-19页 |
| ·菌株及质粒 | 第18页 |
| ·酶与试剂 | 第18页 |
| ·主要仪器设备 | 第18-19页 |
| ·培养基 | 第19页 |
| ·方法与步骤 | 第19-28页 |
| ·菌株保存 | 第19页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第19-20页 |
| ·质粒DNA的大量制备 | 第20页 |
| ·质粒DNA的小量制备 | 第20-21页 |
| ·重组质粒转化入 E.coli BL21感受态细胞中 | 第21页 |
| ·大肠杆菌细胞的破碎 | 第21页 |
| ·海藻糖合成酶活力的测定和酶活单位的定义 | 第21-23页 |
| ·来自Thermobifida fusca海藻糖合成酶的纯化 | 第23-27页 |
| ·粗酶的提取及酶活测定 | 第23页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第23-25页 |
| ·镍金属亲和层析 | 第25页 |
| ·透析 | 第25-26页 |
| ·Sephacryl S-300 HR凝胶柱层析 | 第26-27页 |
| ·重组菌(pSE380-TreS-th)表达产物SDS-PAGE电泳 | 第27页 |
| ·SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第27-28页 |
| 第三章 结果与分析 | 第28-39页 |
| ·来自THERMOBIFIDA FUSCA重组酶的纯化结果 | 第28-29页 |
| ·纯化各步酶蛋白的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第28页 |
| ·融合重组酶的纯化总表 | 第28-29页 |
| ·非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第29-31页 |
| ·来自THERMOBIFIDA FUSCA重组酶的酶学特性 | 第31-34页 |
| ·酶作用的最适温度和pH测定 | 第31-32页 |
| ·酶反应动力学分析 | 第32-33页 |
| ·重组酶转化特性的研究 | 第33-34页 |
| ·来自THERMUS THERMOPHILUS HB8重组酶的酶学性质 | 第34-37页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE检测 | 第34-35页 |
| ·重组酶作用的最适温度和pH测定 | 第35-36页 |
| ·重组酶转化特性研究 | 第36-37页 |
| ·讨论 | 第37-39页 |
| ·重组菌破胞缓冲液 | 第37-38页 |
| ·Thermobifida fusca海藻糖合成酶的稳定性 | 第38页 |
| ·海藻糖合成酶转化率 | 第38-39页 |
| 第四章 海藻糖合成酶酶蛋白结晶条件的摸索 | 第39-44页 |
| ·材料 | 第41页 |
| ·方法与步骤 | 第41-44页 |
| ·悬滴法结晶原理 | 第41-42页 |
| ·结晶前处理 | 第42页 |
| ·晶体培养 | 第42-43页 |
| ·试验观测结果与分析 | 第43-44页 |
| 第五章 结论与展望 | 第44-46页 |
| ·结论 | 第44页 |
| ·展望 | 第44-46页 |
| 参考文献 | 第46-52页 |
| 附录 | 第52-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第56页 |
