| 目录 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-32页 |
| ·伪狂犬病研究进展 | 第9-18页 |
| ·本病的特点 | 第9-10页 |
| ·伪狂犬病流行动态 | 第10-11页 |
| ·猪伪狂犬病病毒诊断方法的研究进展 | 第11-14页 |
| ·猪伪狂犬基因工程疫苗研究进展 | 第14-18页 |
| ·伪狂犬病毒及其研究进展 | 第18-27页 |
| ·PrV的病原学特性 | 第19-20页 |
| ·PrV流行病学 | 第20页 |
| ·PrV分子生物学研究进展 | 第20-23页 |
| ·伪狂犬病毒gE研究进展 | 第23-27页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第27-32页 |
| ·表达载体 | 第27-28页 |
| ·各种类型表达系统的构成及特点 | 第28-30页 |
| ·原核表达载体的基本要求及现有类型 | 第30-32页 |
| 第二章 研究目的和意义 | 第32-33页 |
| 第三章 猪伪狂犬病病毒闽A株GE基因的克隆表达及其抗原多肽的变性复性研究 | 第33-53页 |
| ·材料和方法 | 第33-44页 |
| ·细胞、病毒、质粒和菌株 | 第33-34页 |
| ·酶和试剂 | 第34-35页 |
| ·仪器设备 | 第35页 |
| ·主要试剂及溶液的配制 | 第35-38页 |
| ·引物的设计与合成 | 第38-39页 |
| ·病毒基因组DNA的提取 | 第39页 |
| ·gE基因主要抗原区的获取 | 第39页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第39页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第39页 |
| ·gE克隆质粒的构建 | 第39-41页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第41-42页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第42页 |
| ·表达产物的检测 | 第42-43页 |
| ·重组gE工程菌的制备 | 第43页 |
| ·包涵体的制备与蛋白质的变性溶解 | 第43页 |
| ·gE蛋白的复性 | 第43-44页 |
| ·gE复性蛋白浓度、纯度的测定 | 第44页 |
| ·结果 | 第44-49页 |
| ·gE基因主要抗原表位区段的PCR扩增与克隆与序列测定: | 第44页 |
| ·重组质粒PT630的鉴定及序列分析 | 第44-46页 |
| ·原核表达载体的构建: | 第46-47页 |
| ·gE630蛋白主要抗原区在大肠杆菌中的诱导表达及表达产物的检测 | 第47-48页 |
| ·包涵体的分离、变性和复性 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49-52页 |
| ·gE全基因的表达 | 第49-50页 |
| ·PrV gE基因的克隆。 | 第50-51页 |
| ·关于载体pET-28a的BamHⅠ和HindⅢ双酶切 | 第51页 |
| ·Western-blotting分析 | 第51页 |
| ·包涵体纯化、变性和复性 | 第51-52页 |
| ·小结 | 第52-53页 |
| 第四章 以重组GE630抗原建立检测伪狂犬抗体间接ELISA诊断方法的研究 | 第53-61页 |
| ·材料和方法 | 第53-56页 |
| ·抗原 | 第53页 |
| ·试剂及其耗材 | 第53页 |
| ·所用溶液的配制 | 第53-54页 |
| ·间接ELISA方法的操作程序 | 第54页 |
| ·ELISA方法的建立 | 第54-55页 |
| ·血清中抗E.coli成分的除去 | 第55页 |
| ·特异性试验 | 第55页 |
| ·敏感性试验 | 第55-56页 |
| ·间接ELISA重复性试验 | 第56页 |
| ·临床血清样品的检测 | 第56页 |
| ·结果 | 第56-59页 |
| ·抗原包被和待检血清最适稀释倍数的测定: | 第56页 |
| ·抗原包被和封闭条件的选择: | 第56-57页 |
| ·酶标抗体稀释浓度的选择: | 第57页 |
| ·血清和酶标抗体最适工作时间的确定 | 第57页 |
| ·间接ELISA方法阴阳性临界值的确定 | 第57-58页 |
| ·ELISA特异性试验 | 第58页 |
| ·敏感性试验 | 第58-59页 |
| ·重复性试验 | 第59页 |
| ·临床样品的检测 | 第59页 |
| ·讨论 | 第59-60页 |
| ·小结 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-69页 |
| ABSTRACT | 第69-70页 |
