| 第一章 前言 | 第1-23页 |
| 第一节 谷胱甘肽过氧化物酶 | 第14-19页 |
| 1. GPX 的结构 | 第14-16页 |
| 2. GPX 的催化机制 | 第16-17页 |
| 3. GPX 的生物学作用 | 第17-19页 |
| 第二节 谷胱甘肽过氧化物酶的人工模拟 | 第19-23页 |
| 1. 化学合成的小分子模拟物 | 第19-20页 |
| 2. 含硒十五肽 | 第20-21页 |
| 3. 以环糊精为骨架构建的GPX模拟物 | 第21页 |
| 4. 含硒抗体酶 | 第21-23页 |
| 第二章 化学伴侣对单链抗体可溶性表达的影响 | 第23-37页 |
| 第一节 序言 | 第23-24页 |
| 1. 研究背景 | 第23-24页 |
| 2. 实验设计 | 第24页 |
| 第二节 材料和方法 | 第24-27页 |
| 1. 实验材料 | 第24-26页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·细胞株 | 第24页 |
| ·主要仪器 | 第24-25页 |
| ·主要试剂的配制 | 第25-26页 |
| 2. 实验方法 | 第26-27页 |
| ·通过化学伴侣进行 BL21-2F3 表达条件的优化 | 第26页 |
| ·单链抗体的分离纯化 | 第26-27页 |
| ·表达产物的鉴定 | 第27页 |
| 第三节 结果分析与讨论 | 第27-37页 |
| 1. 实验结果 | 第27-36页 |
| ·化学伴侣对表达条件的影响 | 第27-34页 |
| ·单链抗体的分离纯化 | 第34-35页 |
| ·单链抗体的蛋白印记鉴定 | 第35-36页 |
| 2. 讨论 | 第36-37页 |
| 第三章 含硒五肽模拟谷胱苷肽过氧化物酶的构建及其生物学效应的研究 | 第37-63页 |
| 第一节 实验设计 | 第37-39页 |
| 1. 研究背景 | 第37页 |
| 2. 实验设计 | 第37-39页 |
| 第二节 含硒五肽的制备 | 第39-52页 |
| 一、硒代半胱氨酸及其衍生物的合成 | 第39-44页 |
| 1. 实验材料 | 第39页 |
| ·主要试剂 | 第39页 |
| ·主要仪器 | 第39页 |
| 2. 实验方法 | 第39-42页 |
| ·β–氯–丙氨酸的合成 | 第39-40页 |
| ·硒代胱氨酸的合成 | 第40-41页 |
| ·H–Sec(PMB)–OH 的合成 | 第41页 |
| ·Fmoc–Sec(PMB)–OH 的合成 | 第41页 |
| ·硒代胱氨酸及其衍生物的检测方法 | 第41-42页 |
| ·硒代胱氨酸及其衍生物的验证 | 第42页 |
| 3. 结果和讨论 | 第42-44页 |
| ·Fmoc–Sec(PMB)–OH 逆推结果 | 第42-43页 |
| ·H–Sec(PMB)–OH 逆推结果 | 第43-44页 |
| ·Fmoc–Sec(PMB)–OH 的质谱分析 | 第44页 |
| 二、合成具有GPX活性的多肽 | 第44-52页 |
| 1. 实验材料 | 第44-45页 |
| ·主要试剂 | 第44-45页 |
| ·主要仪器 | 第45页 |
| 2. 实验方法 | 第45-47页 |
| ·多肽合成 | 第45-46页 |
| ·GPX 活力测定 | 第46页 |
| ·稳态动力学研究 | 第46-47页 |
| ·最适反应温度和pH值 | 第47页 |
| 3. 结果 | 第47-51页 |
| ·Se-5P 的序列设计 | 第47页 |
| ·Se-5P 的质谱分析 | 第47-48页 |
| ·Se-5P 的 GPX 活力 | 第48页 |
| ·Se-5P 的最适pH 和最适温度 | 第48-49页 |
| ·Se-5P 的稳态动力学性质研究 | 第49-51页 |
| 4. 讨论 | 第51-52页 |
| 第三节 含硒五肽生物学效应的研究 | 第52-63页 |
| 一、Se-5P 对心肌线粒体抗氧化损伤的保护作用 | 第52-56页 |
| 1. 实验材料 | 第52页 |
| ·主要试剂 | 第52页 |
| ·主要仪器 | 第52页 |
| ·试剂配制 | 第52页 |
| 2. 实验方法 | 第52-53页 |
| ·牛心线粒体的制备 | 第52页 |
| ·Fe2+/Vc 诱导线粒体损伤 | 第52-53页 |
| ·线粒体膨胀度的测定 | 第53页 |
| ·脂质过氧化水平的测定 | 第53页 |
| ·统计学分析 | 第53页 |
| 3. 结果 | 第53-55页 |
| ·GPX 模拟物对损伤线粒体膨胀度的影响 | 第53-54页 |
| ·GPX 模拟物对损伤线粒体的脂质过氧化的抑制 | 第54-55页 |
| 4. 讨论 | 第55-56页 |
| 二、Se-5P 对过氧化氢诱导肝细胞损伤的保护作用 | 第56-63页 |
| 1 .实验材料 | 第56-57页 |
| ·主要试剂 | 第56页 |
| ·主要仪器 | 第56页 |
| ·试剂配制 | 第56-57页 |
| 2. 实验方法 | 第57-59页 |
| ·肝脏细胞的原代培养 | 第57页 |
| ·脂质过氧化损伤模型的建立 | 第57-58页 |
| ·自由基诱生系统中脂质过氧化物的测定 | 第58页 |
| ·MTT 法测定细胞存活率 | 第58-59页 |
| ·细胞胞浆酶—乳酸脱氢酶(LDH)含量测定 | 第59页 |
| 3. 结果 | 第59-62页 |
| ·不同浓度的Se-5P对H_2O_2诱导损伤肝细胞的MDA含量的影. | 第59-60页 |
| ·不同浓度的Se-5P对HO诱导损伤肝细胞的LDH的影响 | 第60-61页 |
| ·不同浓度的Se-5P对H_2O_2诱导损伤肝细胞存活率的影响 | 第61-62页 |
| 4.讨论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 中文摘要 | 第73-76页 |
| ABSTRACT | 第76-80页 |
| 作者简历 | 第80-81页 |
