几丁质酶产生菌的筛选鉴定及几丁质裂解酶基因的克隆与表达
| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 前言 | 第12-13页 |
| 1 材料与方法 | 第13-25页 |
| ·材料 | 第13-15页 |
| ·菌株 | 第13页 |
| ·培养基 | 第13页 |
| ·试剂及药品 | 第13-15页 |
| ·重要仪器设备 | 第15页 |
| ·方法 | 第15-25页 |
| ·胶状几丁质的制备 | 第15页 |
| ·几丁质酶产生菌的分离筛选 | 第15页 |
| ·酶活性测定 | 第15页 |
| ·菌株对病原菌的拮抗试验 | 第15-16页 |
| ·几丁质酶蛋白的提取及其抑菌活性检测 | 第16页 |
| ·菌株分类鉴定 | 第16-17页 |
| ·几丁质酶基因克隆及表达 | 第17-20页 |
| ·序列测定及分析 | 第20-21页 |
| ·PET-ChiMC表达载体构建与功能验证 | 第21-23页 |
| ·ChiMC基因功能验证 | 第23-24页 |
| ·蛋白质几丁质酶活性检测 | 第24-25页 |
| 2 结果与分析 | 第25-48页 |
| ·几丁质酶产生菌的筛选 | 第25页 |
| ·几丁质酶活性测定结果 | 第25-26页 |
| ·菌株对病原菌的拮抗试验 | 第26-28页 |
| ·对水稻纹枯病菌和稻瘟菌的体外抑菌试验 | 第26-27页 |
| ·对其它病原菌拮抗活性测定 | 第27-28页 |
| ·粗蛋白抑菌活性检测结果 | 第28-29页 |
| ·菌株分类鉴定结果 | 第29-35页 |
| ·C-10菌株分类鉴定结果 | 第29-31页 |
| ·F2菌株分类鉴定结果 | 第31-33页 |
| ·P6菌株分类鉴定结果 | 第33-35页 |
| ·几丁质酶基因克隆及在大肠杆菌中的表达 | 第35-37页 |
| ·DNA酶切及目的片段的回收 | 第35页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第35-36页 |
| ·重组质粒提取及酶切 | 第36-37页 |
| ·序列测定与分析 | 第37-42页 |
| ·基因预测 | 第37页 |
| ·蛋白质性质与结构预测 | 第37-38页 |
| ·基因功能预测 | 第38-42页 |
| ·PET-ChiMC表达载体构建与功能验证 | 第42-45页 |
| ·PET-ChiMC载体构建与表达 | 第42-44页 |
| ·表达蛋白活性检测 | 第44-45页 |
| ·ChiMC基因功能验证 | 第45-46页 |
| ·对真菌的拮抗作用 | 第45页 |
| ·ChiMC基因的辅助杀虫效果 | 第45-46页 |
| ·蛋白质几丁质酶活性检测 | 第46-48页 |
| 3 讨论 | 第48-51页 |
| ·几丁质酶产生菌的筛选 | 第48页 |
| ·几丁质酶基因克隆 | 第48-49页 |
| ·ChiMC基因的表达 | 第49页 |
| ·几丁质酶产生菌株及 ChiMC基因的应用前景 | 第49-51页 |
| 4 文献综述 | 第51-63页 |
| ·几丁质与几丁质酶概述 | 第51-52页 |
| ·微生物几丁质酶的研究历史及现状 | 第52-55页 |
| ·微生物几丁质酶的分布 | 第52-53页 |
| ·几丁质酶的种类 | 第53页 |
| ·几丁质酶的可诱导表达特性及理化特性 | 第53-54页 |
| ·几丁质酶与其它防卫蛋白的协同表达 | 第54页 |
| ·微生物几丁质酶可能的抗病虫作用机理 | 第54-55页 |
| ·微生物几丁质酶的分子生物学基础 | 第55-57页 |
| ·几丁质酶基因的结构 | 第55-56页 |
| ·细菌几丁质酶氨基酸序列的同源性比较 | 第56-57页 |
| ·微生物几丁质酶在生物防治中的应用 | 第57-61页 |
| ·抗病原真菌 | 第57-58页 |
| ·抗虫 | 第58页 |
| ·在基因工程中的应用 | 第58-61页 |
| ·关于磷酸甘露糖异构酶 | 第61-63页 |
| ·磷酸甘露糖异构酶概述 | 第61页 |
| ·作为植物转化中的安全选择标记基因 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 附录-1 测序结果 | 第69-70页 |
| 附录-2 核苷酸序列比对结果 | 第70-72页 |
| 附录-3 蛋白质序列比对结果 | 第72-73页 |
| 在读期间发表的论文 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
