| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 第一章 引言 | 第10-20页 |
| 1.反硝化作用在氮素循环中的意义 | 第10-11页 |
| 2.反硝化作用概述 | 第11-13页 |
| 3.反硝化细菌的分布及特点 | 第13-14页 |
| 4.反硝化细菌中亚硝酸盐还原酶的研究进展 | 第14-18页 |
| 5.本工作立题依据及研究思路 | 第18-20页 |
| 第二章 亚硝酸盐还原酶编码基因突变菌株的构建 | 第20-40页 |
| 1 实验材料 | 第20-23页 |
| ·菌株和质粒 | 第20-21页 |
| ·培养基 | 第21页 |
| ·抗生素 | 第21-22页 |
| ·生物化学试剂、酶及试剂盒 | 第22页 |
| ·PCR引物 | 第22-23页 |
| ·溶液的配制 | 第23页 |
| ·实验仪器 | 第23页 |
| 2 实验方法 | 第23-30页 |
| ·基因组DNA的分离 | 第23-24页 |
| ·碱裂解法小量提取细菌质粒DNA | 第24-25页 |
| ·细菌总DNA的提取 | 第25页 |
| ·PCR扩增 | 第25-26页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第26页 |
| ·酶切及连接反应(Sambrook et al., 1989) | 第26-27页 |
| ·感受态细胞的制备及连接产物的转化 | 第27页 |
| ·质粒的接合转移 | 第27-28页 |
| ·菌株固氮活性测定 | 第28-29页 |
| ·总蛋白的测定 | 第29页 |
| ·反硝化能力的测定 | 第29-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-39页 |
| ·A1501中亚硝酸盐还原酶为NirS型 | 第30-31页 |
| ·A1501的反硝化作用及影响因子 | 第31-34页 |
| ·亚硝酸还原酶编码基因突变菌株的构建 | 第34-37页 |
| ·突变株M3的理化性质测定 | 第37-39页 |
| 4.讨论 | 第39-40页 |
| 第三章 A1501菌株nirS基因表达调控的研究 | 第40-51页 |
| 1 实验材料 | 第40-41页 |
| ·菌株和质粒 | 第40页 |
| ·酶、试剂和试剂盒 | 第40页 |
| ·PCR引物 | 第40-41页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性分析试剂 | 第41页 |
| 2 实验方法 | 第41-44页 |
| ·质粒载体的制备： | 第41-42页 |
| ·PCR片段的回收 | 第42页 |
| ·产物片段的克隆 | 第42页 |
| ·酶切及连接反应 | 第42-43页 |
| ·电击转化法感受态细胞的制备、转化 | 第43页 |
| ·β-半乳糖苷酶(β-Galactosidase)活性的测定 | 第43-44页 |
| 3 结果和分析 | 第44-50页 |
| ·nirS基因表达载体构建 | 第44-47页 |
| ·nirS基因表达载体转入A1501中 | 第47页 |
| ·斯氏假单胞菌nirS基因的表达调节 | 第47-49页 |
| ·nirS表达载体转入rpoN突变菌株 | 第49-50页 |
| 4.讨论 | 第50-51页 |
| 第四章 结论 | 第51-52页 |
| 附录1 突变株和野生菌株定殖能力的初步研究 | 第52-58页 |
| 1 实验材料 | 第52-53页 |
| ·菌株 | 第52页 |
| ·培养基 | 第52-53页 |
| ·试剂 | 第53页 |
| ·溶剂 | 第53页 |
| 2 实验方法 | 第53-55页 |
| ·水稻根表定植试验 | 第53页 |
| ·定植的显微镜检测 | 第53-54页 |
| ·扫描电镜观察 | 第54-55页 |
| 3 结果和分析 | 第55-58页 |
| ·突变株根表定殖的平板记数 | 第55-56页 |
| ·突变株在水稻根表的定殖及扫描电镜观察 | 第56-58页 |
| 附录2 | 第58-60页 |
| 附录3 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-69页 |
| 致谢 | 第69页 |