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抑制差减杂交法构建鳙鱼染毒微囊藻毒素-LR后差异表达基因文库及相关基因表达分析

中文摘要第1-6页
英文摘要第6-13页
引言第13-25页
 水体富营养化现象与蓝藻水华发生的危害第13页
 藻毒素的介绍与分类第13-15页
 微囊藻毒素在鱼体内的分布第15-19页
 MCs 的毒理机制与解毒研究第19-25页
第一章 鱼体染毒与取样试验第25-26页
   ·材料与试剂第25页
     ·试验动物第25页
     ·试剂第25页
     ·仪器设备第25页
   ·方法第25-26页
   ·病理学观察第26页
第二章 染毒后GST 基因在不同时间的表达变化分析第26-31页
   ·材料与试剂第26-27页
     ·试验材料第26页
     ·试剂设备第26-27页
   ·方法第27-29页
     ·总RNA 提取第27页
     ·总RNA OD 值、浓度测定第27页
     ·总RNA 电泳检测第27页
     ·cDNA 第一链反转录反应第27-28页
     ·GST 基因的semi-quantitative RT-PCR第28-29页
   ·结果分析第29-30页
     ·总RNA 纯度与完整性第29-30页
     ·GST 基因半定量表达结果第30页
   ·讨论第30-31页
第三章 差减杂交文库的构建与差异表达基因筛选及分析第31-53页
   ·材料与试剂第31-32页
     ·试验材料第31页
     ·试验试剂第31-32页
   ·方法第32-42页
     ·总RNA 提取第32页
     ·m RNA 纯化第32-33页
     ·m RNA 的浓缩第33页
     ·cDNA 第一链合成第33-34页
     ·cDNA 第二链合成第34页
     ·Rsa I 消化反应第34-35页
     ·接头连接反应第35-36页
     ·接头连接效率分析第36-37页
     ·第一轮杂交第37页
     ·第二轮杂交第37-38页
     ·第一轮PCR第38-39页
     ·第二轮PCR(巢式)第39页
     ·PCR 产物的回收第39-40页
     ·差减效率分析第40页
     ·载体连接、克隆与转化(T/A 克隆)第40-41页
     ·阳性克隆的PCR 检测第41-42页
     ·测序与ESTs 的BLAST 分析第42页
   ·结果分析第42-45页
     ·总RNA 定性与mRNA 纯化浓缩分析第42页
     ·cDNA 合成与Rsa Ⅰ 酶切效率分析第42-43页
     ·差减效率分析第43页
     ·差减文库插入片段大小的检测第43-44页
     ·测序与BLAST 分析第44-45页
   ·讨论第45-53页
第四章 差异表达基因在染毒后各时间的半定量表达分析第53-59页
   ·材料与试剂第53页
   ·方法第53-55页
     ·总RNA 提取第53页
     ·cDNA 第一链合成第53-54页
     ·正反向文库中差异表达基因的PCR 扩增第54页
     ·电泳与数据分析第54-55页
   ·结果分析第55-57页
   ·讨论第57-59页
小结第59-60页
参考文献第60-69页
致谢第69页

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