鸡堆型艾美耳球虫特异性单链抗体基因的构建及其表达
| 1 引言 | 第1-13页 |
| 2 材料与方法 | 第13-25页 |
| ·实验动物与虫种 | 第13页 |
| ·抗原制备所需主要试剂 | 第13页 |
| ·细胞复苏所需主要试剂 | 第13页 |
| ·mRNA提取所需主要试剂 | 第13页 |
| ·反转录所需主要试剂 | 第13-14页 |
| ·重链可变区和轻链可变区基因扩增所需主要试剂 | 第14页 |
| ·单链抗体基因构建及其表达所需主要试剂 | 第14页 |
| ·单链抗体鉴定所需试剂 | 第14-15页 |
| ·菌种与质粒载体 | 第15-16页 |
| ·主要仪器 | 第16-17页 |
| ·使用引物 | 第17页 |
| ·计算机分析软件 | 第17页 |
| ·杂交瘤细胞的复苏 | 第17-18页 |
| ·细胞复苏 | 第17页 |
| ·杂交瘤细胞的扩大培养 | 第17-18页 |
| ·抗原制备 | 第18-19页 |
| ·鸡球虫卵囊的复壮 | 第18页 |
| ·卵囊的纯化 | 第18页 |
| ·孢子囊的分离 | 第18页 |
| ·子孢子的脱囊 | 第18页 |
| ·子孢子的纯化 | 第18-19页 |
| ·子孢子抗原的制备 | 第19页 |
| ·杂交瘤细胞上清液效价测定 | 第19页 |
| ·重链、轻链可变区基因的扩增 | 第19-20页 |
| ·杂交瘤细胞总RNA的提取 | 第19页 |
| ·RNA浓度、纯度的鉴定 | 第19-20页 |
| ·RNA反转录为cDNA第一链 | 第20页 |
| ·重链可变区基因的扩增 | 第20页 |
| ·轻链可变区基因的扩增 | 第20页 |
| ·PCR产物的测定 | 第20页 |
| ·重链、轻链可变区基因的克隆及测序 | 第20-22页 |
| ·轻链、重链可变区基因片段的回收 | 第20-21页 |
| ·回收产物的鉴定 | 第21页 |
| ·回收产物与载体pMD18-T连接 | 第21页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第21页 |
| ·转化 | 第21页 |
| ·阳性重组子的筛选 | 第21-22页 |
| ·阳性重组子的鉴定 | 第22页 |
| ·提取两阳性重组子质粒并测序 | 第22页 |
| ·单链抗体基因的构建、表达及其表达产物的鉴定 | 第22-25页 |
| ·单链抗体基因的构建 | 第22-23页 |
| ·单链抗体基因酶切片段与表达载体酶切片段的获得 | 第23页 |
| ·单链抗体基因酶切片段与表达载体酶切片段的回收 | 第23页 |
| ·目的基因片段与表达载体的连接 | 第23页 |
| ·感受态细胞的制备(方法同2.17.4) | 第23页 |
| ·转化 | 第23-24页 |
| ·阳性重组子的筛选 | 第24页 |
| ·阳性重组子的鉴定 | 第24页 |
| ·诱导表达 | 第24页 |
| ·表达产物鉴定 | 第24-25页 |
| 3 结果与分析 | 第25-32页 |
| ·堆型艾美耳球虫的抗原制备结果 | 第25页 |
| ·抗原制备过程中的镜检观测结果 | 第25页 |
| ·子孢子表面抗原蛋白浓度测定 | 第25页 |
| ·杂交瘤细胞上清液效价测定 | 第25-26页 |
| ·RNA浓度、纯度的鉴定 | 第26页 |
| ·紫外分光光度计检测 | 第26页 |
| ·电泳检测 | 第26页 |
| ·轻链、重链可变区PCR结果检测 | 第26-27页 |
| ·轻链、重链可变区基因片段回收结果检测 | 第27页 |
| ·轻链可变区基因的重组质粒PCR鉴定 | 第27页 |
| ·重链可变区基因的重组质粒PCR鉴定 | 第27-28页 |
| ·轻链、重链可变区基因测序结果及其分析 | 第28-29页 |
| ·单链抗体基因与表达载体酶切结果 | 第29-30页 |
| ·质粒PCR鉴定结果 | 第30页 |
| ·SDS聚丙烯酞胺凝胶电泳检测结果 | 第30-32页 |
| 4 讨论 | 第32-35页 |
| 5 结论 | 第35-36页 |
| 参考文献 | 第36-43页 |
| 附录A 主要试剂的配制 | 第43-45页 |
| 附录B 轻链、重链可变区测序图 | 第45-47页 |
| 附录C 由可变区基因序列推导出的氨基酸序列 | 第47-48页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第48-49页 |
| 作者简历 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50-53页 |
| 鸡球虫病免疫预防的回顾与展望 | 第53-57页 |
| 鸡传染性贫血研究进展 | 第57页 |
