| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-9页 |
| 本论文缩略词表 | 第9-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-34页 |
| 一、模式植物拟南芥的研究概况 | 第14-15页 |
| 二、血红蛋白的研究概况 | 第15-26页 |
| 1.植物血红蛋白 | 第19-26页 |
| ·共生的血红蛋白 | 第20-21页 |
| ·非共生的血红蛋白 | 第21-24页 |
| ·截短的(truncated)(2-on-2)血红蛋白 | 第24-26页 |
| 三、过氧化氢(H_2O_2)的研究概况 | 第26-32页 |
| 1、过氧化氢(H_2O_2)参与低氧胁迫反应 | 第29-30页 |
| 2、过氧化氢(H_2O_2)与一氧化氮(NO)之间的相互关系 | 第30-32页 |
| 四、本论文的研究目的和意义 | 第32-34页 |
| 第二章 低氧胁迫下转基因拟南芥和野生型的拟南芥发生的生理变化 | 第34-66页 |
| 一、前言 | 第34-36页 |
| 二、材料和方法 | 第36-55页 |
| 1、质粒载体的构建及转化 | 第36-45页 |
| ·pBluescriptⅡSK(-)／ALGLBl的构建 | 第36-42页 |
| ·pBluescriptⅡSK(-)／ALGLBl的转化 | 第42-43页 |
| ·pBluescriptⅡSK(-)／ALGLBl的鉴定 | 第43-45页 |
| 2 植物表达载体的构建及转化(载体结构示意图如图2所示) | 第45-48页 |
| ·35S∷AtGLBl植物表达载体的构建及转化 | 第45-46页 |
| ·RNAi∷AtGLBl载体的构建 | 第46-47页 |
| ·转化农杆菌(GV3101) | 第47页 |
| ·拟南芥转化 | 第47-48页 |
| 3 拟南芥转化后的种子收获 | 第48页 |
| 4 拟南芥转化植株的筛选与移栽 | 第48-49页 |
| 5 拟南芥转化植株的鉴定 | 第49-50页 |
| ·拟南芥转化植株的微量DNA提取 | 第49页 |
| ·转基因拟南芥植株T1代的PCR检测 | 第49-50页 |
| ·转基因拟南芥植株T2代的Kan鉴定 | 第50页 |
| 6 Northern杂交 | 第50-54页 |
| 7 拟南芥的种植 | 第54-55页 |
| 8 过氧化氢(H_2O_2)含量检测 | 第55页 |
| 9 乙醇脱氢酶(ADH)酶活检测 | 第55页 |
| 三、结果 | 第55-64页 |
| 1.重组载体的鉴定 | 第55-60页 |
| ·pBS／AtGLBl的鉴定 | 第56-58页 |
| ·pMD／AtGLBl的鉴定 | 第58-59页 |
| ·菌落PCR鉴定 | 第58-59页 |
| ·酶切鉴定 | 第59页 |
| ·pZYI／AtGLBl／AtGLBl的鉴定 | 第59-60页 |
| 2 转化菌株的鉴定 | 第60页 |
| 3.转基因植株的获得 | 第60页 |
| 4 Northern杂交鉴定 | 第60-62页 |
| 5.过氧化氢的含量 | 第62页 |
| 6.乙醇脱氢酶(ADH)的酶活性 | 第62-64页 |
| 四、讨论 | 第64-66页 |
| 第三章 体外过氧化氢对拟南芥的作用 | 第66-73页 |
| 一、前言 | 第66-67页 |
| 二、材料和方法 | 第67-68页 |
| 1 叶肉细胞原生质体的提取及处理 | 第67页 |
| 2 过氧化氢处理拟南芥叶片 | 第67-68页 |
| 三、结果 | 第68-72页 |
| 四、讨论 | 第72-73页 |
| 第四章 拟南芥血红蛋白1(AtGLBl)与过氧化氢的相互作用 | 第73-88页 |
| 一、前言 | 第73-74页 |
| 二、材料和方法 | 第74-83页 |
| 1.表达载体(pET32a／AtGLBl)的构建 | 第74-76页 |
| ·载体准备 | 第75页 |
| ·片断准备 | 第75-76页 |
| ·连接 | 第76页 |
| ·正确重组子的筛选 | 第76页 |
| 2.重组载体(pET32a／AtGLBl)转入表达宿主BL21(DE3) | 第76-77页 |
| 3.AtGLBl的表达及纯化 | 第77-82页 |
| ·重组基因在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达 | 第77页 |
| ·SDS—PAGE胶的制备及电泳 | 第77-79页 |
| ·Ni-NTA柱层析纯化蛋白 | 第79-80页 |
| ·透析 | 第80-81页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第81页 |
| ·亲和层析柱的再生 | 第81-82页 |
| 4.血红蛋白和过氧化氢反应的检测 | 第82-83页 |
| ·蛋白质的前处理 | 第82页 |
| ·停流仪分析过氧化氢(H_2O_2)与氧合血红蛋白的反应 | 第82-83页 |
| 三、结果 | 第83-86页 |
| 1.重组载体的鉴定 | 第83页 |
| 2.重组全蛋白在大肠杆菌中的表达(如图) | 第83-84页 |
| 3.过氧化氢(H_2O_2)与氧合血红蛋白的反应 | 第84-86页 |
| 四、讨论 | 第86-88页 |
| 第五章 低氧胁迫对拟南芥抗氧化系统的影响 | 第88-95页 |
| 一、前言 | 第88-89页 |
| 二、材料和方法 | 第89-90页 |
| 1.抗氧化酶的分析 | 第89页 |
| 2 抗坏血酸和谷胱甘肽的分析 | 第89-90页 |
| 三、结果 | 第90-93页 |
| 四、讨论 | 第93-95页 |
| 第六章 拟南芥血红蛋白1(GLBl)的亚细胞定位 | 第95-104页 |
| 一、前言 | 第95-96页 |
| 二、材料和方法 | 第96-98页 |
| 1 实验材料 | 第96页 |
| 2 实验方法 | 第96-98页 |
| ·构建HBT-AtGLBl∷SGFP-NOS／pUC载体 | 第96-97页 |
| ·基因枪转化 | 第97-98页 |
| ·显微镜观察及图像采集 | 第98页 |
| 三、结果 | 第98-102页 |
| 1 构建载体 | 第98-100页 |
| 2 观察 | 第100-102页 |
| 四、讨论 | 第102-104页 |
| 第七章 总讨论 | 第104-106页 |
| Reference | 第106-126页 |
| 附录部分 | 第126-132页 |
| 发表及投稿文章 | 第132-133页 |
| 致谢 | 第133页 |
